1. 将经酶切和测序鉴定正确的重组质粒(pGEX-3X + PER, 表达出融合蛋白GST +PERc134个氨基酸,分子量为26kD + 15kD = 41kD)转入合适的大肠杆菌中。 2. 划线接种于LB琼脂+合适的抗菌素(氨苄青霉素,终浓度100μg/ml)的平皿,挑单个菌落,接种于LB+氨苄 2-5ml, 37oC摇过夜。 以上已事先准备好。 以下为本...
8,大肠杆菌表达系统与蛋白表达纯化大肠杆菌表达系统遗传背景清楚,目的基因表达水平高,培养周期短,抗污染能力强等特点,是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具,因此熟练掌握并运用大肠杆菌表达系统的基本原理和常规操作是对每一个研究生
(2)表达重组蛋白: a. 将pET-28a(+) - PDK1载体转化到大肠杆菌BL21 (DE3)细胞中; b. 从单克隆菌落中挑选阳性菌株,进行扩增培养; c. 加入异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达PDK1蛋白; d. 通过SDS-PAGE和Western blot分析检测表达情况。 (3)纯化PDK1蛋白: a. 收集表达PDK1的细胞,进行裂解并使用超声波处理; ...
新冠灭活病毒疫苗是用理化方法灭活新冠病毒,再通过纯化等步骤制备出的疫苗;新冠重组蛋白疫苗是将新冠病毒的目标抗原基因整合到表达载体中,然后将表达载体转化到仓鼠卵巢细胞中,经诱导表达出大量的抗原蛋白,再通过纯化而得到的疫苗;新冠腺病毒载体疫苗以腺病毒作为载体,将目标抗原基因重组到载体病毒基因组中得到的疫苗。
在293细胞中大量扩增腺病毒,一旦重组病毒已被纯化和鉴定,即可在293细胞中进行大量扩增。对于蛋白表达,则根据需要可在任何一步扩增步骤中停止,离心沉淀细胞后按照适当的操作方法进行蛋白抽提(根据蛋白类型的不同抽提上清或细胞沉淀)。为优化时间进程,每个感染周期必须与下一次细胞扩增培养同步。如果由于各种原因不能同步,则...
新冠灭活病毒疫苗是用理化方法灭活新冠病毒,再通过纯化等步骤制备出的疫苗;新冠重组蛋白疫苗是将新冠病毒的目标抗原基因整合到表达载体中,然后将表达载体转化到仓鼠卵巢细胞中,经诱导表达出大量的抗原蛋白,再通过纯化而得到的疫苗;新冠腺病毒载体疫苗以腺病毒作为载体,将目标抗原基因重组到载体病毒基因组中得到的疫苗。