Gal4激活下游的报告基因His和Ade的表达,酵母菌株就能合成组氨酸与腺嘌呤,加上AD和BD上携带的营养标记基因,其对应的酵母菌株就能在四缺板上生长,而对照组因为不存在互作,也就不能重组成有功能的Gal4转录因子,最终也就不能在四缺板上生长。
可能是酵母细胞的OD值太低,细胞数量少,导致诱饵蛋白量低,很难检测到,可以增加液体培养量;另一种原因可能是诱饵蛋白包含大量的稀有密码子,酵母很难进行翻译,建议优化氨基酸序列,合成一条由酵母细胞能够识别的密码子组成的编码相同的氨基酸序列的核苷酸,有望大大提高诱饵蛋白在酵母细胞中的表达。 22.四缺板上筛选到的...
x-gal staining ,x-gal要现配现用并且注意遮光保存。当然z-buffer可以放置久一点。另外就是液氮冰冻菌...
X-α-Gal是一种酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的显色底物,用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。通过蓝白颜色筛选,快速和简便地识别阳性的蓝色克隆,无需费时的β-半乳糖苷酶报告基因检测。 X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶...
是因为等待时间不足够,因为实验中我们发现互作很强的阳性对照3至4个小时就会变蓝,通常我们自己的蛋白最常见的是12至24小时变蓝。也有些在24小时之后有变蓝。与整个实验条件,蛋白互作的强弱都有关系。
酵母杂交 LacZ 基因 X-gal 显色试剂(EGY48) 储存条件:常温保存,X-gal 储存液-20℃保存,有效期一年. 产品内容: 成分 货号 规格 10×BU buffer/ 10×BU Salt(过滤除菌) X-gal 储存液(20mg/ml) 20%半乳糖溶液(过滤除菌) 20%棉子糖溶液(过滤除菌) SD/-Trp/-Ura with Agar SL0960 SL3800 SL0980 SL...
GAL4酵母双-混合系统x-gal指示板式混合器技术文章 GAL4酵母双-混合系统x-gal指示板式-混合器技术文章 Clontech酵母手册指出,x-gal指示片剂的SD公式为:棉子糖2%,半乳糖1%,BU盐(pH 7.0),x-gal等(LexA系统) 请问,谁做的,Gal4系统的配方不一样? 手册说:LexA系统的lacZ活性通过另外的质粒被转化到酵母中; LacZ活...
MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码外泌型的α-半乳糖苷酶。如果蛋白无互作,报告基因MEL1不表达,菌落呈乳白色;如果蛋白发生互作,报告基因MEL1表达,菌落呈蓝色,亦可根据菌落蓝色深浅,初步判断蛋白互作强度。X-α-Gal与缺陷型筛选平板同时使用,可有效提高筛选效率,排除假阳性克隆,主要应用于酵母双杂交实验...
X-α-gal是酵母半乳糖苷酶(MEL1)的显色底物,MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,该基因受GAL4调控。MEL1编码的分泌型的α-半乳糖苷酶可水解无色的X-α-gal,形成蓝色产物。MEL1基因激活后,X-α-gal检测阳性克隆表达的α-半乳糖苷酶,阳性克隆直接在含有X-α-gal的固体培养基上呈蓝色。因此无需裂解...
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