酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system)的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。反式转录激活因子,例如酵母转录因子 GAL4在结构上是组件式的(modular),往往由两个或两个以上结构上可以分开,功能上相互独立的结构域(domain)构成,其中有DNA结合功能域(...
酵母双杂交系统的原理主要包括构建酵母表达载体、转化酵母细胞、筛选阳性克隆和验证蛋白质相互作用。下面将详细介绍酵母双杂交系统的原理。 首先,构建酵母表达载体。在酵母双杂交系统中,需要构建两个不同的表达载体,一个用于携带“诱饵”基因,另一个用于携带“靶标”基因。诱饵基因编码的蛋白质与靶标基因编码的蛋白质是...
酵母双杂交系统的原理: 酵母双杂交系统(principle of yeast two-hybridsystem)基于蛋白质间的相互作用原理,其中包括:转录调控、信号传递及代谢途径等方面。首先需要构建两个载体,一个是酵母转录因子的DNA结合结构域(BD)融合载体,另一个则是酵母活化装置的活化结构域(AD)融合载体。在BD载体中含有一个目标基因的蛋白质...
该系统利用酵母细胞中转录因子的功能来分析蛋白质与蛋白质之间的相互作用。 该系统的基本原理如下: 首先,选择一个酵母菌株,该菌株的基因组中包含了人类感兴趣的蛋白质的编码基因。同时,构建两个酵母菌株的转录因子的变体,这两个转录因子变体分别包含感兴趣的蛋白质的结构域。其中一个转录因子变体被命名为“BD融合蛋白...
【考点】酵母双杂交系统的基本原理和应用。【解析】酵母双杂交体系(two -hybrid-system)也叫相互作用陷阱(interaction-trap),是上世纪90年代初发展起来的分离基因的新方法,可用于分离能与已知靶蛋白质(target protein)相互作用的基因。【答案】(1)基本原理:真核生物的转录因子大多是由两个结构上分开、功能上独立的结...
答:酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)是在酵母体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的基因系统,也是一个基于转录因子模块结构的遗传学方法。酵母双杂交系统的建立得力于对真核细胞调控转录起始过程的认识。许多真核生物的转录激活因子都是由两个可以分开的、功能上相互独立的结构域(domain)组成的。例如,酵母的转录激活...
答:基本原理:酵母的转录活化因子 GLA4含有两个功能结构域:氨基端的 DNA结合结 构域(BD)和羧基端的转录激活结构域(AD)。它们彼此分开时,各自仍具有各自的功 能。 Fields 根据此特征设计了双杂交系统。 构建过程:构建两个重组质粒:一个表达 BD,另一个表达AD。如果在BD基因上再接上 一个蛋白X基因,在AD基因上...
酵母三杂交系统可以用于检测蛋白质-核酸之间的相互作用。三杂交系统的本质与双杂交是相同的,只是需通过第三个分子的介导把两个杂交蛋白带到一起。它的基本原理是将一个已知与RNA结合的蛋白与BD构建第一个融合蛋白,将待测蛋白质与AD构建第二个融合蛋白,同时构建一条含有两个不同结合...