（2）Y187菌株在酵母单杂交和双杂交实验中都是常用的。（3）在这个系统中，trp和leu的营养缺陷分别对应于两个载体的筛选标记。这意味着，通过添加相应的营养缺陷剂，可以有效地筛选出阳性克隆。（4）pHIS2载体上包含了报告基因HIS3，它将在阳性克隆中表达，从而提供实验的证据。（5）筛选剂为3-AT，它能够根据酵...
一、酵母菌株 选择适合的酵母菌株是实验成功的第一步。常用的酵母菌株包括Saccharomyces cerevisiae等,这些菌株具有良好的遗传特性和转化效率,适合用于单杂交实验。 二、载体DNA 载体DNA是进行基因克隆和表达的关键。在酵母单杂交实验中,常用的载体包括质粒,它们能够携带特定的DNA片段进入酵母细胞。质粒应具有适当的复制起点...
placZ2u载体在酵母单杂交实验中的应用主要包括以下几个方面:1)用于筛选与目标蛋白相互作用的蛋白质;2)用于研究蛋白质相互作用的机制;3)用于研究蛋白质的功能及其调控机制。这些应用使得placZ2u载体成为酵母单杂交实验中不可或缺的工具。 总之,placZ2u载体是一种酵...
在酵母单杂交实验中,需要构建包含目标基因的DNA载体。DNA载体的构建通常由以下几个步骤组成: 2.1 DNA提取 首先,从参与实验的酵母菌株中提取DNA。可以使用商业DNA提取试剂盒或自制DNA提取方法。确保提取的DNA质量和纯度满足实验要求。 2.2 扩增目标基因 利用聚合酶链反应(PCR)方法,从酵母菌株的基因组DNA中扩增目标基因。
在材料准备完毕后,我们就可以开始酵母单杂交载体的构建工作了。首先,我们需要利用PCR技术扩增目标基因片段。在这个过程中,我们需要严格控制PCR反应的条件,以确保扩增出的基因片段具有足够的特异性和纯度。 接下来,我们需要将扩增出的目标基因片段与DNA载...
酵母双杂原理图 对于酵母单杂: 酵母单杂交(One-hybrid system,Y1H) 酵母单杂交的检测是基于猎物蛋白和诱饵DNA的相互作用。 诱饵序列位于报告基因的上游,可启动下游报告基因的转录 如上图,简单来说,酵母单杂需要将BaitDNA序列整合进入酵母基因组中,将Prey蛋白构建到AD载体中,与转录因子GAL4的AD结构域融合表达。如果...
5构建并筛选酵母单杂交文库(cDNA融合表达文库的构建及筛选)(1) 构建并在SD/-Leu/AbA培养基上检测 17、Y1HGoldBait/AbAi菌株。注:AbA的浓度根据构建诱饵载体时转入酵母抑制本底表达时的浓度而定。(2)按SMART tech no logy步骤合成ds cDNA,其浓度为2-5弋/20儿。(3)用Yeast Transformation System 2的方法转化...
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图1. 酵母单杂交原理 问2. 构建单杂诱饵载体时,对顺式作用元件或启动子序列有什么要求? 答2:构建单杂诱饵载体的DNA片段,一般选择顺式作用元件或启动子序列。 顺式作用元件(cis-acting element)是存在于基因旁侧序列中,能影响基因表达的一段DNA序列,其作用是参与调控基因表达;顺式作用元件本身不编码任何蛋白质...
问1:酵母单杂交为什么要检测自激活? 答:Pmin启动子自身会导致下游的报告基因有本底表达,而且克隆到载体的顺式作用元件有可能会与酵母内源性转录因子结合,所以说自激活是个普遍存在的现象。只有在没有内源性转录因子可以与顺式作用元件结合或者结合能力非常弱的前提下,报告基因的本底表达才可以被抑制,单杂实验才可以...