在酵母单杂交实验中,需要构建包含目标基因的DNA载体。DNA载体的构建通常由以下几个步骤组成: 2.1 DNA提取 首先,从参与实验的酵母菌株中提取DNA。可以使用商业DNA提取试剂盒或自制DNA提取方法。确保提取的DNA质量和纯度满足实验要求。 2.2 扩增目标基因 利用聚合酶链反应(PCR)方法,从酵母菌株的基因组DNA中扩增目标基因。
除了上述材料外,还需要一系列试剂和设备来完成实验。例如,培养基用于酵母细胞的生长和筛选;抗生素等选择试剂用于筛选成功转化的酵母细胞;PCR仪、电泳仪等设备则用于DNA片段的扩增和检测。 综上所述,酵母单杂交载体构建需要精心准备各种实验材料。从酵母菌株的选择到载体DNA的准备,再到特异性引物的设计和酶类的选用,每...
这包括提取DNA、检测DNA的质量和纯度、验证目标基因是否成功插入到酵母细胞中等等。 通过以上步骤,我们就可以成功构建出酵母单杂交载体了。当然,这只是一个基本的构建流程,具体的实验条件和操作步骤可能因实验需求和材料差异而有所不同。因此,在实际操作...
载体构建为了在植物细胞/原生质体中验证酵母单杂交系统解析的植物转录因子及其关键结构域,本研究构建了一套与酵母单杂交系统相匹配的植物瞬时表达分析系统,并在拟南芥叶片原生质体中进行了瞬时表达分析.结果 显示,以AtDPBF4的转录激活区(CRⅡ)构建的效应载体可在拟南芥原生质体中激活报告基因GUS的转录.这一结果与AtDPBF4...
成功,单杂交筛选转录因子效果良好。pMmakeHI82转化效率达到1.6X10e个克隆/3 g,酵母单杂交获得156 个阳性克隆.实验为研究香蕉ACS基因调控因子打下基础.. 关键词 香蕉;AC8启动子;载体构建;酵母单杂交 分类号 $668.1 ReportVectorsConstructionandEfiectAnalysisofBananaACSPromoterS ...
构建酵母单杂交诱饵载体的时候有没有把去除启动子中的TATA box，我看takaer的酵母单杂交技术书中有写到 ...
构建了"月月红"酵母单杂交cDNA文库和MYB7酵母双杂交诱饵载体PGBKT7-MYB7,并运用FPNI-PCR方法扩增出MYB7基因上游1.86kb长度序列,为后期的酵母单杂交和酵母双杂交cDNA文库筛选工作做出铺垫.具体实验内容与结果如下: 1.以实验室基地大棚的"月月红"花瓣与花芽为植物材料构建"月月红"酵母单杂交cDNA文库,通过检测此文库的...
关键词:辣椒;CaWRKY39;生物信息学分析;酵母单杂交pGADT7载体构建辣椒(CapsicumannuumL.)是茄科辣椒属植物,是我国重要的经济作物之一.根据FAO数据,2021年我国辣椒种植面积达82.7万公顷,约占全球辣椒种植面积的40%,年产值超过3500亿元.但番茄斑萎病毒(Tomatospottedwiltvirus,TSWV)的入侵严重影响了辣椒的产量和品质.TSWV...
摘要:根据玉米大斑病菌(Setosphaeriaturcica)黑色素合成还原酶基因St3HNR、St4HNR5′端侧翼序列和酵母单杂交报告载体pHIS2.1多克隆位点,设计了带有限制性内切酶位点的特异性引物,并以玉米大斑病菌01-23菌株基因组DNA为模板,PCR扩增启动子区域长度约1000bp的片段,双酶切目的片段及载体pHIS2.1回收并连接,构建2个还原酶...
专注大分子互作研究。 酵母双杂交为什么要检测自激活?理论上BD可单独与GAL4上游活化序列UAS结合,但不能引起转录。但是如果将一段具有转录激活活性的转录因子构建到BD载体上,若其表达产生的诱饵蛋白单独与UAS结合后能引起下游报告基因的转录,则说明bait具有自激活现象。另外酵母细胞的某些具有转录激活活性的内源蛋白也可能...