只要在设计引物的时候引入一段线性化载体两端的序列,然后将PCR产物和线性化的载体加入到含有BSA的In-Fusion酶溶液中,在室温下放置半个小时就可以进行转化了。这种方法特别适合大批量的转化。 这里顺便提一下如果有什么技术给大家留下深刻影响,欢迎大家发email推荐给生物通。说不定你的推荐可以让它成为年度之星呢。
当序列相似度低于90%时,以第一设计方法设计正向引物,所述第一设计方法包括: 第一调整步骤,使正向引物与具有SEQ ID NO:2的通用反向引物之间的Tm值差异不超过2度,当正向引物的Tm值低于57℃时,在5’端依序地增加具有SEQ ID NO:1的核苷酸序列,以使正向引物的Tm值达到57℃至61℃;以及 第一确认步骤,确认正向引...
[0001] 本发明设及基因工程技术领域,特别设及一种用于动物线粒体基因组扩增的通用 引物混合物及其设计和扩增方法,W及包含所述通用引物混合物的试剂盒。【背景技术】[0002] 线粒体是细胞内半自主性细胞器,来自于母系遗传并具有自身的一套基因组,其 基因稳定、排列保守几乎不发生重组,易于扩增和测序已成为研究动物...
本发明的技术方案还公开了所述通用引物的设计方法,具体为:登录NCBI网站中的GenBank(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)数据库搜索已测定的编号为U37541.1、NC_002084.1、NC_002355.1、KP163643.1、NC_003081.2、NC_001712.1、NC_002609.1、NC_002651.1、NC_004371.1、NC_006895.1、NC_005437.1、NC_006515.2、AJ270997.1、AB...
本发明涉及一种能够高效快捷扩增多种头足类的头足类线粒体COI基因的通用引物及设计和扩增方法,通过设计头足类COI基因的通用引物,能够一次性批量扩增多种头足类COI基因,不需要针对某个单独物种设计特异性引物,既节省了时间成本,又大大提高了工作效率,具有高效快捷的特点,为头足类的种类鉴定、系统进化、种质资源保护和可持续...
无论是茎环法还是加尾法,其引物的设计最终要得到“一对半”,“一对”是指PCR扩增的上下游引物,“半”是反转录引物。这3个引物是完成整个实时定量实验所必须的。比较一下2种方法所设计出的引物,不难发现,加尾法的引物设计起来更加容易,当要测定的miRNA种类很多时,加尾 法的优势就更加明显了。在反转录引物上,...
本发明专利技术涉及一种能够高效快捷扩增多种头足类的头足类线粒体COI基因的通用引物及设计和扩增方法,通过设计头足类COI基因的通用引物,能够一次性批量扩增多种头足类COI基因,不需要针对某个单独物种设计特异性引物,既节省了时间成本,又大大提高了工作效率,具有高效快捷的特点,为头足类的种类鉴定、系统进化、种质资源保护...
1)本发明提供的头足类线粒体coi基因通用引物,可以一次性高效批量对多种头足类进行扩增,能够为头足类物种鉴定提供极大的便利; 2)本发明在头足类线粒体coi基因两段保守区域设计通用引物,扩增出中间的变异序列,扩增长度在600-700bp左右,既有足够的信息位点用于物证鉴定区分,又能保证一个测序反应就能完成,操作简单,节约成本...
第一种方法是使用茎环反转录引物(stem-loopRTprimer)进行cDNA合成,并使用miRNA特异性探针(miRNAspecificprobe)或通用探针(universalprobe)对miRNA进行定量。第二种方法则是使用线性的通用反转录引物(universalRTprimer)进行cDNA合成,并使用miRNA特异性正向引物(miRNAspecificforwardprimer)、反转录引物特异性反向引物(RT-...