简述PCR的原理和引物设计原则。相关知识点: 试题来源: 解析 1.PCR又称聚合酶链反应,是一种在体特异性外扩增目的核酸的的酶促合成反应。其基本原理是:在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下,利用DNA半保留复制和其在不同温度下变性复性的特性,人为控制温度——高温变性,低温复性,室温延伸,循环多次后...
引物设计原理: PCR是利用DNA在体外95℃高温时变性成为单链,低温(60℃左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72℃左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5′-3′)的方向合成互补链。这三个热反应过程的重复称为一个循环,经过20～40个循环可扩增得到大量位于两条引物之间序列的...
一、引物设计的原理 PCR 反应特异性扩增的一个关键条件是引物的正确设计,使用不合适的 PCR引物容易导致实验失败:表现为扩增出目的带之外的多条带(如形成引物二聚体带),不出带或出带很弱。 二、引物的用途 合理的引物设计有利于得到特异性的产...
PCR的原理和引物设计原则。相关知识点: 试题来源: 解析 答:①PCR的原理是依据细胞中DNA半保留复制机理,DNA在不同温度下变性、复性的特性,人为控制温度—高温变性、低温复性、适温延伸,循环多次后,可使目的基因得到扩增;以待扩增的DNA分子为模板5’末端和3’末端互补配对的寡核苷酸片段为引物,在DNA聚合酶的作用下,...
一、引物设计的原理 PCR 反应特异性扩增的一个关键条件是引物的正确设计,使用不合适的 PCR引物容易导致实验失败:表现为扩增出目的带之外的多条带(如形成引物二聚体带),不出带或出带很弱。 二、引物的用途 合理的引物设计有利于得到特异性的产物。 三、实验材料与仪器 ...
引物是PCR反应体系中的关键,关系到PCR扩增的效率和扩增的特异性。引物设计好坏与PCR结果密切相关,是PCR成功与否的关键影响因素。 引物设计原理: PCR是利用DNA在体外95℃高温时变性成为单链,低温(60℃左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶...
1、PCR技术的基本原理 PCR技术的基本原理:该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将...
以下是PCR引物设计的原理及原则。 一、PCR引物设计的原理 1.引物长度:引物的长度通常为18-25个碱基对。引物过短可能导致非特异性引物结合,引物过长可能导致反应条件不佳。较长引物(20-25个碱基对)通常用于扩增目标DNA较长的片段,而较短引物(18-20个碱基对)通常用于扩增较短的目标DNA片段。 2.引物序列:引物的...
简述PCR引物设计的原则?①长度及碱基分布 引物长度一般为10-30个核苷酸。四种碱基分布应遵循随机原则,G+C含量一般为40%-60%,引物与非特异性扩增序列的同源性不