1 定量逆转录-聚合酶链反应（RT-qPCR ）一、实验原理 逆转录 -聚合酶链反应 (Quantitative Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction ，RT-qPCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA ，以其中的mRNA 作为模板，采用Oligo （dT ）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA ，再以cDNA 为模板进行PCR 扩增，而获得...
对于qRT-PCR称呼有不同的形式,但总体上来说,实时定量反转录聚合酶链式反应(Real-Time Quantitative Reverse Transcription PCR)可能精细一些,毕竟qPCR仪器在采集数据的时候就是一种实时荧光数据收集,当然并不否认定量逆转录聚合酶链反应的称呼是错误的。 1.1 cDNA cDNA是一种由mRNA逆转录而来的DNA(有单/双链两种情况)...
扩增试剂和具有rna依赖性聚合酶活性和dna依赖性聚合酶活性两者的聚合酶的反应混合物;(b)通过孵育不超过5分钟的逆转录时间将rna逆转录成dna;以及(c)通过执行包括多个扩增循环的热循环方案来扩增dna,其中每个扩增循环至少包括变性步骤和退火步骤。
首先,通过逆转录酶将RNA转录成cDNA(反转录过程),然后使用DNA聚合酶扩增cDNA。通过纳米量热法分析PCR反应几率,可以定量分析样品中RNA的表达水平。 qRT-PCR技术具有高灵敏度,高特异性和较高的准确性。与传统的聚合酶链反应(PCR)相比,qRT-PCR技术可以在更短的时间内得到更加准确的结果。此外,它的操作简化了DNA净化和...
目的应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)对脊髓灰质炎病毒(PV)进行型内鉴定,为进行常规rRT-PCR型内鉴定方法奠定基础.方法采用世界卫生组织(WHO)推荐的rRT-PCR方法,对WHO发放的PV株和实验室分离的PV株进行型内鉴定(ITD)和疫苗衍生PV株(VDPV)筛选.结果 ITD rRT-PCR的实验结果与毒株的VP1编码区序列测定...
所述方法包括提供含有所述样品、扩增试剂和具有RNA依赖性聚合酶活性和DNA依赖性聚合酶活性两者的聚合酶的反应混合物;通过孵育不超过5分钟的逆转录时间将所述RNA逆转录成DNA;以及通过执行包括多个扩增循环的热循环方案来扩增所述DNA,其中每个扩增循环至少包括变性步骤和退火步骤。
比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒(流感)病毒的灵敏度与特异性。 【研究机构】 浙江省疾病预防控制中心 【研究人员】 李婵卢亦愚严菊英 【研究时间】 实验于2005年完成 【...
实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应 (RT 姜红涛姚秀林抚顺市疾病预防控制中心，辽宁抚顺113006目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的差异。方法采用实时荧光定...
实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应(RT姜红涛姚秀林抚顺市疾病预防控制中心,辽宁抚顺113006[摘要]目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的差异。方法采用实时荧光定量RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离2种方法,同时对流感监测点送检的80份疑似流感标本检测流感病毒。结果...