在转染后24小时,用荧光显微镜观察实验结果并记录荧光蛋白表达情况,如下图所示,说明转染成功,且转染效率还可以,如果不带有荧光,可以用GFP来对照,可以放在一个单独的孔中,或是与目标质粒共转染,同时用Q-PCR和者WB来检测。 转染后发现转染效率不高,可以通过两种方法: 1、复转染,即...
比较不同转染方法的一个快速而简单的方法是使用一个携带荧光标记蛋白的质粒,这样你就可以在显微镜下观察转染的细胞。你可能需要尝试几种不同浓度的DNA / siRNA来确定你的细胞系的最佳转染效率。 3.尝试使用永生细胞系 与原始细胞系相比,永生细胞系无疑更容易工作,但仍然可能会观察到...
常用的转染方法包括化学法、电穿孔法、病毒载体介导转染和生物矢量直接注射法等。下面将对这些转染方法进行详细比较。 1.化学法: 化学法是最简单、最常用的转染方法之一,主要通过化学试剂与DNA或RNA形成复合物,进而被细胞摄取。常用的化学试剂有钙磷酸盐、聚乙烯亚胺(PEI)、脂质体、高分子聚合物等。化学法的优势在于...
病毒转染 原理:对于用脂质体不能实现转染的细胞,可以采用病毒转染。可用于蛋白质过表达或抑制,是临床研究中最常用的方法。它通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中,可用于难转染细胞、原代细胞的稳定性转染。 实验步骤:通过基因克隆生成重组病毒 → 采用非病毒法转染包装细胞系,扩增并分离得到重组病毒颗粒→纯化并滴...
物理方法---在细胞膜表面产生一个瞬时的孔从而导入DNA，如电穿孔法。三、常见的转染方法的原理、特点及步骤 以下简单介绍目前实验室最为常用的两种方法。脂质体转染法：阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA-脂质体复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过...
一、细胞转染方法 目前细胞转染方法主要分为生物方法、化学方法和物理方法三大类。生物方法包括病毒转染法;化学方法包括阳离子脂质体法、阳离子聚合物法、磷酸钙共沉淀法、DEAE-葡聚糖法;物理方法包括电穿孔法、基因枪法(粒子轰击法)、显微注射法、激光介导转染法。
转染是将小分子如DNA、RNA或抗体强制引入真核细胞，常用的基因敲除转染方法有慢病毒法、化学法（Lipo）和电转法（RNP），这些方法各有千秋，在实验中往往会有不同的表现和限制。一、慢病毒法 慢病毒法是指利用慢病毒作为载体，通过两端长末端重复序列（LTR）让慢病毒的基因组整合到宿主基因组中转录比较活跃的位点...
物理转染法：电穿孔法、显微注射法、基因枪法 化学转染法：磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物法、阳离子脂质体法 生物转染法：病毒介导法 对于了解或做过细胞转染实验的研究人员，想必上述方法大家都是非常熟悉的，我们也总结了这些方法的原理以及优缺点比较(表1)，帮助大家找到适合自己实验的细胞转染方法。表1：三种转染...
1、包二聚体转染 包二聚体转染是由三部分组成:DNA片段,10%二聚体和CaCl2溶液,将需要转染的DNA片段溶解在CaCl2溶液中,添加二聚体并调节pH值,即可形成包二聚体复合体,将复合体注入细胞内,从而达到转染目的。应用包二聚体的转染方法可以很好地穿越细胞膜,可以达到突变外源基因的目的,并且细胞损伤小,可以获得相对高...