质粒扩增、提取、转化和转染等操作程序;一、感受态细菌制备(CaCl2法);1.从LB平板上挑取新活化的大肠杆菌单菌落,接种;2.取0.5ml上述振荡过夜的菌液,转入含50m;3.将培养液50ml分装到4个10ml的离心管中;4.4℃条件下,4000r/min离心10分钟,;5.每管加入预冷的0.1mol/lCaCl2溶液;6.冰上放置10min后,4℃条件下 ...
⑥将疑似阳性克隆的白斑选出,接到新的含有抗生素的LB中培养14小时左右,做菌液PCR或抽提质粒酶切以进一步鉴定转化是否成功。 转染: ①将3μl(约4μg)纯化好的经除菌的质粒DNA溶入250μl无血清培养基DMEM (无双抗)中,轻轻混匀,室温放置5 mim。 ②再吸取10μl脂质体溶入250μl无血清培养基DMEM(无双抗)中,轻...
《质粒扩增、提取、转化和转染等操作程序》由会员分享,可在线阅读,更多相关《质粒扩增、提取、转化和转染等操作程序(1页珍藏版)》请在人人文库网上搜索。 一般普通质粒扩增 先将质粒转化到 DH5 等大肠杆菌中 通过扩大培养获取大量含有质粒的大肠杆菌 大肠杆菌的培养需要用到 LB 液体培养基 配方见下文 根据质粒带有...
质粒扩增、提取、转化和转染等操作程序;一、感受态细菌制备(CaCl2法);1.从LB平板上挑取新活化的大肠杆菌单菌落,接种;2.取0.5ml上述振荡过夜的菌液,转入含50m;3.将培养液50ml分装到4个10ml的离心管中;4.4℃条件下,4000r/min离心10分钟,;5.每管加入预冷的0.1mol/lCaCl2溶液;6.冰上放置10min后,4℃条件下 ...
质粒扩增、提取、转化和转染等操作程序;一、感受态细菌制备(CaCl2法);1.从LB平板上挑取新活化的大肠杆菌单菌落,接种;2.取0.5ml上述振荡过夜的菌液,转入含50m;3.将培养液50ml分装到4个10ml的离心管中;4.4℃条件下,4000r/min离心10分钟,;5.每管加入预冷的0.1mol/lCaCl2溶液;6.冰上放置10min后,4℃条件下 ...
质粒扩增、提取、转化和转染等操作程序 质粒扩增、提取、转化和转染等操作程序 一、感受态细菌制备(CaCl2法) 1. 从LB平板上挑取新活化的大肠杆菌单菌落,接种于5ml不加Amp的LB培养基中,37℃振荡培养过夜(200r/min,至OD=1.5左右)。 2. 取0.5ml上述振荡过夜的菌液,转入含50ml的LB的三角烧瓶(1%)中,37℃条件下...
1、质粒扩增、提取、转化和转染等操作程序一、感受态细菌制备(cacl2法)1. 从lb平板上挑取新活化的大肠杆菌单菌落,接种于5ml不加amp的lb培养基中,37振荡培养过夜(200r/min,至od=1.5左右)。2. 取0.5ml上述振荡过夜的菌液,转入含50ml的lb的三角烧瓶(1%)中,37条件下振荡培养22.5小时左右(200r/min),使od600达到...
⑥将疑似阳性克隆的白斑选出,接到新的含有抗生素的LB中培养14小时左右,做菌液PCR或抽提质粒酶切以进一步鉴定转化是否成功。 转染: ①将3μl(约4μg)纯化好的经除菌的质粒DNA溶入250μl无血清培养基DMEM (无双抗)中,轻轻混匀,室温放置5 mim。 ②再吸取10μl脂质体溶入250μl无血清培养基DMEM(无双抗)中,轻...
质粒扩增、提取、转化和转染等操作程序 一、感受态细菌制备(CaCl2法) 1. 从LB平板上挑取新活化的大肠杆菌单菌落,接种于5ml不加Amp的LB培养基中,37℃振荡培养过夜(200r/min,至OD=1.5左右)。 2. 取0.5ml上述振荡过夜的菌液,转入含50ml的LB的三角烧瓶(1%)中,37℃条件下振荡培养2~2.5小时左右(200r/min),使...
扩增提取操作程序转化培养基抗生素 一般普通质粒扩增:先将质粒转化到DH5α等大肠杆菌中,通过扩大培养获取大量含有质粒的大肠杆菌。大肠杆菌的培养需要用到LB液体培养基,配方见下文。根据质粒带有的抗生素抗性基因,还需要在LB中加入适量相应抗生素,如氨苄青霉素、卡那霉素等。LB液体培养基(Luria-Bertani):称取蛋白胨(Trypt...