升温前PCR产物成双链结构,具有较高的荧光强度信号,当逐渐升高温度的同时,DNA双链逐渐打开,双链中嵌入的染料减少,随之荧光信号也逐渐降低,当双链DNA解链一半时,荧光信号急剧下降,此时的温度即为融解温度(Tm)。Tm值与PCR扩增产物的序列有关,对于某一PCR产物其值是固定的,因而可以根据融解曲线分析PCR反映的特异性。
qPCR实验反应结束后进行的融解曲线分析是什么?有什么用?使用染料法分析的qPCR扩增反应结束后,通过升温至95度,同时收集这个过程中管内荧光数值的变化,以此分析管内产物的特异性。理论上,反应扩增结束后,管内已经有大量的目标产物,这些都是双链DNA,而反应体系内的染料SYBR Green会嵌在DNA双链的小沟内,当温度逐渐升高...
融解曲线是温度——荧光信号的一阶负导数的二维曲线,我们通常所说的融解曲线,实际上是通过温度——荧光数据计算后的曲线,二楼所说的是数据处理的方法,由于实际上实验得到的是离散数据,所以在数据处理时的方法会导致融解曲线看起来变宽或者变窄。在分析方法一致的情况下,融解曲线表征的是产物纯度,高度表示的是表达丰度。
摘要:目的 探讨SYBR-Green I实时荧光PCR(SYBR-PCR)结合融解曲线分析(D.C)技术进行α-珠蛋白生成障碍性贫血(α-地贫)基因诊断的价值.方法 对22个家系中的37份样品采用4管SYBR-PCR结合D.C进行--SEA、-a3.7、-α4.2及非缺失型(αα)4个等位基因型的检测,进而作出基因诊断.同时运用单管多重PCR(mPCR)结合凝胶...
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分析测试,百科网,qPCR融解曲线的峰高由什么决定, m值相同,而峰高低有差异是表达丰度不同,同样的扩增产物也会出现Tm值有微小差异,一般差异在1度以内都可以接受。融解曲线的纵坐标表示荧光信号对温度的一阶负导数。
摘要: 本文利用SYBR Green I实时荧光多重PCR技术,结合融解曲线分析方法建立了针对临床常见细菌耐药基因(大环内酯类耐药基因,β内酰胺酶类耐药基因)的多重检测技术平台,以指导临床重症感染在细菌药敏试验结果没有报告之前的经验性用药治疗. 展开 关键词: 实时荧光多重PCR技术 融解曲线 细菌耐药基因 重症感染 ...
在同一荧光通道内有效区分两种HPV DNA基因亚型.结果:1ng/μl、0.1ng/μl和0.01ng/μlHPV 16和HPV 58模板荧光PCR扩增及融解曲线分析显示,融解曲线分析较定量扩增更灵敏、特异.HPV 16和HPV 58融解曲线对应的Tm值分别为83.5℃和87℃.结论:所建双链置换探针实时荧光定量PCR结合融解曲线分析检测HPV 16、58亚型的方...
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实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-time PCR),是指在PCR扩增反应体系中加入荧光基团,通过对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 融解曲线是PCR反应结束后,将反应液的温度逐渐升高,实时监测荧光染料的荧光信号轻度变化进行的。升温前PCR产物成双链结构,具有较高的...