谷胱甘肽S转移酶（GST）是一个含有211个氨基酸的蛋白，通常将该蛋白加入到重组蛋白的N-末端以便对该重组蛋白进行纯化或检测。由于GST对于其底物-谷胱甘肽具有极高的特异性，所以可以获得更高的纯度。通过GST与Pull-down技术相结合（即GST pull-down技术）可作为体外检测蛋白质相互作用的一种方法，可以验证已知蛋白的互作...
Pull-down 技术又称蛋白质体外结合实验（Binding assay in vitro）， 是一种行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术，蛋白互作分析Pull-down可用于初步研究两种蛋白质的相互作用分析。Pull-down技术是通过将靶蛋白亲和固定于某种基质上作为“诱饵蛋白”，当细胞抽提液与该基质接触时，与靶蛋白相互作用的配体蛋白被...
Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下...
蛋白 Pull Down 是一种通过特定的亲和剂捕获目标蛋白并识别其相互作用蛋白的方法。这种技术基于蛋白之间的特异性相互作用，通过特定的结合反应，将目标蛋白与其相互作用蛋白捕获在一起。1.2 蛋白 Pull Down 技术的步骤 蛋白 Pull Down 技术的步骤包括样品制备、亲和剂结合、洗涤和蛋白鉴定。首先，目标蛋白被萃取并纯化...
Pull-down实验,又称拉下实验,是一种体外亲和纯化技术。(这个实验跟免疫共沉淀实验很像,不同的是免疫共沉淀是在细胞里进行的。)pull down可以作为体外检测蛋白间直接互做的行之有效的方法(没有中间作为“桥梁”的蛋白干扰噢),可用于证实预测的蛋白质-蛋白质相互作用的存在。
Pull-down蛋白质鉴定技术步骤(图片来源:百泰派克生物) Pull-down实验的具体步骤: 1. 表达纯化GST、polyHis或Biotin标记的诱饵蛋白; 2. 使用固定化亲和配体将诱饵蛋白与固相基质稳定结合; 3. 再将诱饵蛋白与待测细胞裂解液进行混合孵育,在这一过程中,诱饵蛋白与目标蛋白相互作用并结合在一起,通过清洗除去非特异性结...
引言 细胞就像是一个池塘,细胞中的各种蛋白就如同池塘中的鱼,这时候我们从细胞这个池塘中“钓”我们想要的鱼,就是蛋白互作。可以采用的“钓鱼”技术有:Pull Down、免疫沉淀/免疫共沉淀、酵母双杂交等
Pull-down 蛋白表达技术的原理主要是利用蛋白质之间的特异性相互作用,通过共表达诱饵蛋白和捕获蛋白,使得它们在细胞内形成复合物。然后,通过一系列的操作,如细胞裂解、蛋白提取、免疫沉淀等,将目标蛋白质从混合的蛋白质组中分离出来。这样,就可以研究蛋白质之间的相互作用,以及它们在生物体内的功能和作用机制。 Pull-do...
Pull-down技术与Co-IP非常相似,只不过后者是用抗体交联磁珠或agarose ,pull-down是用固相化的、已标记的饵蛋白或标签蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-),从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白(对混合液中的所有蛋白)。通过Pull-down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外转录...
通过蛋白-蛋白互作的研究技术GST pull down这个实验,研究人员能够探究蛋白质之间的相互作用,揭示细胞内复杂的信号传递和调控网络。这不仅有助于我们对疾病发生机制的理解,还为药物研发和治疗策略的开发提供了重要的参考。 原理简介 实验流程 (1)蛋白提取与蛋白浓度测定;(2)pull down前WB检测诱饵蛋白及猎物蛋白的表达;...