蛋白 Pull Down 技术作为解析蛋白-蛋白相互作用的有力工具，在揭示细胞内复杂的信号传导网络和蛋白功能调控机制中发挥着重要作用。通过鉴定和研究蛋白之间的相互作用，我们可以更好地理解细胞功能和疾病机制，并为药物开发和疾病治疗提供新的思路和靶点。
可以采用的“钓鱼”技术有:Pull Down、免疫沉淀/免疫共沉淀、酵母双杂交等。 什么是PullDown PullDown类似于大家熟知的免疫沉淀/免疫共沉淀,通过固定在固相载体(鱼竿)上的已知诱饵蛋白(鱼饵),去结合细胞(池塘)中的未知靶蛋白(鱼)。 不同于免疫沉淀/免疫共沉淀这种基于抗体-抗原相互作用的方法,Pull Down是在已知的...
Pull-down实验,又称拉下实验,是一种体外亲和纯化技术。(这个实验跟免疫共沉淀实验很像,不同的是免疫共沉淀是在细胞里进行的。)pull down可以作为体外检测蛋白间直接互做的行之有效的方法(没有中间作为“桥梁”的蛋白干扰噢),可用于证实预测的蛋白质-蛋白质相互作用的存在。 把X,Y两种蛋白在体外分别表达纯化出来(...
谷胱甘肽S转移酶（GST）是一个含有211个氨基酸的蛋白，通常将该蛋白加入到重组蛋白的N-末端以便对该重组蛋白进行纯化或检测。由于GST对于其底物-谷胱甘肽具有极高的特异性，所以可以获得更高的纯度。通过GST与Pull-down技术相结合（即GST pull-down技术）可作为体外检测蛋白质相互作用的一种方法，可以验证已知蛋白的互作...
Pull Down方法是一种利用亲和层析技术，将目标蛋白质与其相互作用的蛋白质一同富集下来的方法。具体步骤如下：1.目标蛋白质结合：将目标蛋白质与亲和标记（如GST、His等）结合，形成融合蛋白。2.亲和层析：将融合蛋白与亲和树脂结合，通过重力或离心力将融合蛋白及其相互作用的蛋白质富集下来。3.洗涤：用缓冲液洗涤富集...
Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下...
1.蛋白 Pull Down 技术的原理 1.1 蛋白 Pull Down 概述 蛋白Pull Down 是一种通过特定的亲和剂捕获目标蛋白并识别其相互作用蛋白的方法。这种技术基于蛋白之间的特异性相互作用,通过特定的结合反应,将目标蛋白与其相互作用蛋白捕获在一起。 1.2 蛋白 Pull Down 技术的步骤 蛋白Pull Down 技术的步骤包括样品制备、亲...
Pull-down技术与Co-IP非常相似,只不过后者是用抗体交联磁珠或agarose ,pull-down是用固相化的、已标记的饵蛋白或标签蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-),从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白(对混合液中的所有蛋白)。通过Pull-down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外转录...
Pull-down蛋白质鉴定技术步骤(图片来源:百泰派克生物) Pull-down实验的具体步骤: 1. 表达纯化GST、polyHis或Biotin标记的诱饵蛋白; 2. 使用固定化亲和配体将诱饵蛋白与固相基质稳定结合; 3. 再将诱饵蛋白与待测细胞裂解液进行混合孵育,在这一过程中,诱饵蛋白与目标蛋白相互作用并结合在一起,通过清洗除去非特异性结...