大多数蛋白-蛋白结合相互作用是瞬时的,只作为细胞内信号级联反应或其他代谢功能的一部分而短暂发生。通过交联方法可以稳定或永久连接相互作用复合物中的成分,从而有助于鉴别这些瞬时接触。一旦相互作用的成分被共价偶联,可以使用其他步骤(例如细胞裂解,亲和纯化和电泳)来制备分析样品,同时可维持最初的相互作用复合物。 同...
交联剂的应用交联是通过共价键化学连接两个或多个分子的过程。 该技术在与蛋白质和其他生物分子一起使用时通常称为生物偶联，是许多蛋白质组学方法的重要组成部分，包括为蛋白质印迹和 ELISA 创建可检测探针以及研究蛋白质结构和相互作用的策略 常用蛋白交联试剂：交联剂概念交联剂（或交联剂）是含有两个或多个反应末...
疏水性的交联剂,可以进入疏水性蛋白质结构域或穿过细胞膜;亲水性的交联剂,可以限制交联至水性环境。 光敏交联 由于将交联剂添加到细胞悬液或细胞裂解物中可能导致许多非特异性交联的形成,为了更好的分析蛋白质-蛋白质的相互作用,还通过添加光敏基团等方式,设计了更复杂的交联剂。这些光敏基团仅在选定的时间内发生反应...
使用这些交联剂,可以通过远紫外光(365 nm)诱导从而特异性的释放活化的醌甲基化物进行蛋白质–蛋白质以及蛋白质–核酸之间的交联。这种策略不仅能够使得蛋白交联获得时间分辨率,引入的强活性的醌甲基化物可与许多邻近的亲核性的残基,如His、Lys、Tyr等侧链反应而产生蛋白交联。并且这些交联剂不仅使适用单个蛋白的交联,也...
有些交联蛋白是杆状的,能够弯曲,由这种交联蛋白形成的网络结构具有相当的弹性,因而能够抵抗机械压力。有些交联蛋白是球状的,能够促使肌动蛋白成束排列,如微绒毛中的肌动蛋白束就是靠这种蛋白交联的,所以,交联蛋白的主要功能是改变细胞内肌动蛋白纤维的三维结构。
在进行蛋白交联实验之前，首先需要准备好样本。样本可以是纯化的蛋白质，也可以是细胞或组织提取物。对于纯化的蛋白质样本，可以直接使用；对于细胞或组织提取物，需要进行适当的处理和纯化，以去除干扰物质。步骤二：交联试剂选择 选择合适的交联试剂是蛋白交联实验的关键步骤。常用的交联试剂包括化学交联剂和光交联剂。
交联是通过共价键化学连接两个或多个分子的过程。 该技术在与蛋白质和其他生物分子一起使用时通常称为生物偶联,是许多蛋白质组学方法的重要组成部分,包括为蛋白质印迹和 ELISA 创建可检测探针以及研究蛋白质结构和相互作用的策略 常用蛋白交联试剂: 产品
生理条件下,大多数蛋白质间相互作用持续时间很短,从而使得相互作用研究变得很困难。交联试剂为这一问题提供了解决方案,即在蛋白质相互作用时将它们共价交联在一起,捕获蛋白质-蛋白质复合物,冻结短暂微弱的相互作用,从而实现对短暂相互作用蛋白的分离和表征。交联过程在体内或体外都可以进行,使用体内还是体外交联取决于项...
蛋白质是生命活动的基石,其功能不仅取决于自身的结构,还深受与其他蛋白质之间相互作用的影响,理解蛋白质相互作用(Protein-Protein Interaction, PPI)对于揭示细胞内的生物过程和疾病的发生机制至关重要。
小分子交联剂蛋白-蛋白以及蛋白-核酸大分子复合体材料 目前常用的小分子交联剂主要与目标蛋白Lys氨基酸残基反应,并且不具有时空分辨率。发展小分子交联剂能够特异性与多个氨基酸残基进行交联并具有时空分辨率能够促进蛋白质相互作用的研究。 带有光保护的醌甲基化物(QM)小分子化学交联剂。使用这些交联剂,可以通过远紫外光(...