其主要原理是:细胞经过洋地黄皂苷(digitonin)透化处理后与目标抗体孵育,抗体进入细胞与目的蛋白结合;细胞再与protein A/G-MNase孵育,加入Ca2+激活MNase,切割目的蛋白结合位点附近的染色质,被切割下来的片段扩散到上清中,从上清液中收集DNA片段,经过常规DNA建库步骤进行...
DNA-蛋白质互作研究方法 Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag)是一种新兴的DNA-蛋白质互作研究方法。CUT&Tag以融合了protein A/G的Tn5转座酶为核心,融合蛋白通过protein A/G与抗体结合,使得Tn5被栓系在靶位点周围,从而在目的位点附近进行酶切反应,并同时引入二代测序所必需的接头序列,产物DNA经过后续提...
CUT&Tag是一种新的DNA—蛋白质互作研究方法。与传统的ChIP-Seq相比,CUT&Tag技术操作简便,无需免疫共沉淀和超声破碎;细胞起始量低。60-100000个细胞就可以满足需要,且CUT&Tag单细胞技术已经实现;一步完成建库,不需要传统的修复末端,加A,加接头构建文库;信噪比高。 CUT&Tag技术优势——特异性强,背景噪音较低;灵敏...
——研究DNA与蛋白质相互作用的方法1凝胶阻滞试验 又叫做DNA迁移率变动试验，是80年代初出现的用于在体外 研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。简单、快捷，是当前被选作分离纯化特定DNA结合蛋白质的 一种典型的实验方法。西北师范大学 精品课程武国凡2015.11 分子生物学与基因工程 第五章分子生物学基本...
研究团队首先设计合成了含光交联基团的DNA探针,该探针能够在低浓度(微摩尔浓度)、短时间(5-10分钟)高效交联相互作用的蛋白质。结合基于质谱的定量蛋白质组学技术,LIKE-XL全局性解析方法在鉴定相互作用蛋白质数目上远超基于非共价作用的技术;比非特异性的交联方法显示更优的效率和更高的灵敏度。LIKE-XL策略不仅成功地...
11.一种研究蛋白质‑DNA互作基因文库的构建方法,所述方法包含如下步骤:(1)收集细胞样本,加入靶蛋白结合一抗和权利要求7‑9任一项所述的抗体孵育组合物进行孵育,透化细胞,所述一抗与靶蛋白结合;(2)加入二抗进行孵育,所述二抗与所述一抗结合;(3)加入转座酶复合物与反应缓冲液,进行片段化反应从而获得片段化的...
小结:该研究建立了一种检测活细胞内特定蛋白质介导的RNA-DNA相互作用的新方法RedChIP,该方法以蛋白质介导的RNA-DNA互作为中心,为研究核ncRNA参与的基因表达调控提供了新的工具。尽管RedChIP是在人源细胞中建立的,类似的方法同样适用于植物细胞,有助于推进植物中核ncRNA的相关研究。
基因工程主要技术原理-研究DNA-蛋白质互作的方法 第六节 研究DNA与蛋白质相互作用的方法 凝胶阻滞试验方法 凝胶阻滞试验用途 2.6.2 DNasel足迹试验 DNasel足迹试验过程 足迹试验的优点 DNasel足迹试验发展 2.6.3 甲基化干扰试验 甲基化干扰试验的具体操作 甲基化干扰试验的用途 DMS化学干扰的主要局限性 2.6.4 体内...
1、本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点,以侏儒蛤和凡纳滨对虾为例提出的利用cut&tag技术进行海洋无脊椎动物蛋白质与基因组dna互作研究的实验方法。 2、为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案: 3、利用cut&tag技术进行海洋无脊椎动物蛋白质与基因组dna互作研究的实验方法,包括以下步骤: 4、s1、催产; ...