其主要原理是:细胞经过洋地黄皂苷(digitonin)透化处理后与目标抗体孵育,抗体进入细胞与目的蛋白结合;细胞再与protein A/G-MNase孵育,加入Ca2+激活MNase,切割目的蛋白结合位点附近的染色质,被切割下来的片段扩散到上清中,从上清液中收集DNA片段,经过常规DNA建库步骤进行...
Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag)是一种新兴的DNA-蛋白质互作研究方法。CUT&Tag以融合了protein A/G的Tn5转座酶为核心,融合蛋白通过protein A/G与抗体结合,使得Tn5被栓系在靶位点周围,从而在目的位点附近进行酶切反应,并同时引入二代测序所必需的接头序列,产物DNA经过后续提取与PCR扩增后,得到直接用...
凝胶阻滞试验方法首先是用放射性同位素标记待检测的DNA片段（亦称探针DNA），然后同细胞蛋白质提取物一道温育，于是便有可能形成DNA一蛋白质复合物。将它加样到非变性的凝胶中，在控制使蛋白质仍与DNA保持结合状态的条件下进行电泳分离，并应用放射自显影技术显现具放射性标记的DNA条带位置。如果细胞层白质提取物中不...
——研究DNA与蛋白质相互作用的方法又叫做DNA迁移率变动试验,是80年代初出现的用于在体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。简单、快捷,是当前被选作分离纯化特定DNA结合蛋白质的一种典型的实验方法。1凝胶阻滞试验原理凝胶阻滞试验用途特殊细胞提取物中,是否存在可同放射性标记的探针DNA结合的蛋白质分...
研究团队首先设计合成了含光交联基团的DNA探针,该探针能够在低浓度(微摩尔浓度)、短时间(5-10分钟)高效交联相互作用的蛋白质。结合基于质谱的定量蛋白质组学技术,LIKE-XL全局性解析方法在鉴定相互作用蛋白质数目上远超基于非共价作用的技术;比非特异性的交联方法显示更优的效率和更高的灵敏度。LIKE-XL策略不仅成功地...
CUT&Tag是一种新的DNA—蛋白质互作研究方法。与传统的ChIP-Seq相比,CUT&Tag技术操作简便,无需免疫共沉淀和超声破碎;细胞起始量低。60-100000个细胞就可以满足需要,且CUT&Tag单细胞技术已经实现;一步完成建库,不需要传统的修复末端,加A,加接头构建文库;信噪比高。 CUT&Tag技术优势——特异性强,背景噪音较低;灵敏...
第五章分子生物学基本技术——核酸蛋白互作 凝胶阻滞试验用途 特殊细胞提取物中，是否存在可同放射性标记的探针DNA结合的蛋白质分子（比如。。。）研究发生此种结合作用之精确的DNA序列的特异性：其办法是在DNA一蛋白质结合反应体系中，加入超量的非标记竞争DNA。。。检测突变对DNA与转录因子结合作用的影响 西北师范大...
1、本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点,以侏儒蛤和凡纳滨对虾为例提出的利用cut&tag技术进行海洋无脊椎动物蛋白质与基因组dna互作研究的实验方法。 2、为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案: 3、利用cut&tag技术进行海洋无脊椎动物蛋白质与基因组dna互作研究的实验方法,包括以下步骤: 4、s1、催产; ...
该研究将RNA-DNA邻近连接和染色质免疫共沉淀(ChIP)技术相结合,建立了新的RedChIP方法,可用于检测活细胞内特定蛋白质介导的RNA-DNA相互作用。 真核生物基因组的大部分序列可被转录成编码和非编码 RNAs(ncRNAs)。ncRNA在细胞质和细胞核中都具有多种功能,其中,核ncRNA可被招募到基因组的不同区域并介导位于相关基因的...