Pull-down是通过磁珠/琼脂糖填料固定带有标记的“诱饵”蛋白,从细胞裂解液、纯化蛋白或表达系统中捕获“猎物”蛋白,然后将复合物蛋白分离后进行凝胶或质谱分析,从而确认互作蛋白的 “身份”。Pull-down较Co-IP的优点在于,不仅能证实靶蛋白的直接相互作用,且洗脱条件也...
蛋白质-蛋白质互作(PPI)在动植物生物学中扮演了关键角色,它们驱动了许多细胞功能和生物过程。因此,识别蛋白质间的互作对于理解生物机制及开发药物和生物技术应用至关重要。传统的筛选方法(如Y2H、COIP等)验证蛋白互作往往耗时长、效率低,并且需要大量的实验资源。为了提高筛选效率,近年来高通量虚拟筛选技术和AI模型的进...
Pull-down是通过磁珠/琼脂糖填料固定带有标记的“诱饵”蛋白,从细胞裂解液、纯化蛋白或表达系统中捕获“猎物”蛋白,然后将复合物蛋白分离后进行凝胶或质谱分析,从而确认互作蛋白的 “身份”。Pull-down较Co-IP的优点在于,不仅能证实靶蛋白的直接相互作用,且洗脱条件也很温和,保留蛋白质结构与天然蛋白复合体的同时,又...
免疫共沉淀主要是用来研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术,其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Pansobin珠上的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“目的蛋白—兴趣蛋白—抗兴趣蛋白抗体—SPA\|Pansobin...
基因是构造生命的基本蓝图,而蛋白质是生命功能的执行者和生命现象的体现者。蛋白质生物学功能的绝大部分都是通过和其它蛋白质的相互作用来实现。因此,蛋白质-蛋白质相互作用(简称‘蛋白质互作’)在生命功能的实现以及生物的进化过程中都扮演极其重要的角色。例如,抗体和抗原蛋白的相互作用,帮助生命个体识别和抵御外界病...
蛋白质作为生命活动的执行者,其功能往往体现在与其他蛋白质的相互作用中,研究蛋白质/小分子-蛋白质相互作用对于人们深入了解和预防传染病、靶向治疗多基因疾病具有重要作用。大规模互作研究通过分析个体蛋白质组、表型特征以及环境因素之间的相互作用,揭示了个体差异和表型多样性的复杂性并为治疗干预提供见解。这种多样性在...
CoIP其实就是两个蛋白相互的IP(免疫沉淀反应)实验,在已知蛋白B和C之间有相互作用的前提下,这种前提一般需要有一个酵母双杂实验或者Pulldown实验来作为支持。IP就是用来验证蛋白C和蛋白B之间相互作用的。如果在Agarose珠上的Protean A/G所结合的抗体,可以结合并拉下蛋白B,那用Western Blot即可检测出蛋白C的表达,反...
而目前高分杂志对于文章的创新性和机制深度的要求越来越高,更是让我们望而生畏,今天就让我们来细数一下“直接机制”中的分子互作实验,希望对大家有点帮助。 1 蛋白质-蛋白质 1.免疫沉淀(IP) 免疫沉淀是用于抗原检测和纯化的最广泛使用的方法之一。免疫沉淀(IP)的原理为:针对特定靶蛋白的抗体与样品(细胞裂解物等...
蛋白质与蛋白质互作是指不同蛋白质之间的相互作用,这种作用可以发生在细胞内或细胞外。蛋白质通过互相结合,形成复杂的细胞机制和信号传导网络,参与多种生物过程,如基因调控、代谢、信号传导等。这种互作是生命活动中的重要组成部分,对维持生物体的正常功能具有重要意义。
聚焦蛋白质互作研究进展与实验方法 蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，蛋白-蛋白互作网络与转录 调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。本文对蛋白质相互作用方法进行总结。一、酵母双杂交系统 酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和...