方法:一般使用各种使蛋白质沉淀的方法,例如:盐析、等电点沉淀、有机溶剂分级沉淀 3.纯化:对获得的目标蛋白质进一步提纯 方法:层析法(包括凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析)、电泳法 二、蛋白质粗分离的常用方法 注:尽量分离蛋白质,且要防止蛋白质变性 ...
a.等电点沉淀法:用弱酸或弱碱调节蛋白质溶液的pH等于pI,破坏蛋白质表面净电荷使蛋白质沉淀。 b.盐析沉淀法: 1.盐析:通过加入大量高浓度中性盐如硫酸铵、氯化钠等,破坏蛋白质分子表面的水化层,中和它们的电荷,而使蛋白质沉淀析出的现象。 2.各种蛋白质亲水性及荷电均有差别,因此通过调节中性盐浓度,可使混合蛋...
根据蛋白质溶解度的差别分离 ①等电点沉淀法：蛋白质在等电点附近溶解度最小，易沉淀析出。利用不同蛋白质等电点的不同，将蛋白质从混合溶液中分开②盐析和盐溶：盐析：大量的中性盐溶液可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质沉淀析出的现象盐溶：低浓度的中性盐溶液促进某些蛋白质的溶解，从而与其他组分分开③有机溶...
常和离子交换,凝胶过滤联合使用。 2、透析 是利用小分子经过半透膜扩散到水( 或缓冲液) 的原理,将无机盐等小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术,常和盐析,盐溶等方法联合使用。
1.盐析:通过加入大量高浓度中性盐如硫酸铵、氯化钠等,破坏蛋白质分子表面的水化层,中和它们的电荷,而使蛋白质沉淀析出的现象。 2.各种蛋白质亲水性及荷电均有差别,因此通过调节中性盐浓度,可使混合蛋白质溶液中的不同蛋白分别沉淀析出,这种方法称为分段盐析。
盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好。由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同,故盐析所需的盐浓度也不一样,因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。 (二)盐的分级沉淀 1.盐类的选择 盐析条件的确定要综合考虑原材料的来源、纯化目的、盐析后目的蛋白的得率及纯化倍数等因素。盐类...
盐析法 READING (一)基本原理 蛋白质等生物大分子物质在水溶液中以一种亲水胶体形式存在,无外界影响时,呈稳定的分散状态(如图3-1)。其主要有两个原因:一.是蛋白质为两性物质,在一定pH条件下呈现一定的带电性,因而在水溶液中会因静电作用而相互排斥,从而保证了分散...
检测蛋白质等电点的方法 以下是8条关于检测蛋白质等电点的方法: 1.电泳法呀,哇哦,就像让蛋白质们来一场赛跑!比如在凝胶上,不同的蛋白质会根据它们的电荷特性以不同速度前进,是不是很神奇呀? 2.盐析法呢,就好像把蛋白质放在一个特殊的“筛子”里,随着盐浓度的变化,能看出它们的沉淀情况,这可是个很妙的...
每种蛋白质都有等电点,在此pH值条件下,蛋白质不带电荷.因此破坏了原来蛋白质溶液中由于带电荷互相排斥而稳定溶解的状态.因此,此时的蛋白质溶解度最低,或者不溶解,因而会沉淀.2.而盐析是不同的概念.盐析沉淀蛋白质方法有两种解释 （1）盐在水溶解度高于蛋白质,因此有大量盐在水中饱和时,蛋白质被...