蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 样品制备 1、蛋白提取 1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。
将夹子放入转移槽槽中，要使夹的黑面对槽的黑面，夹的白面对槽的红面。电转移时会产热，在槽的一边放一块冰来降温。一般用60 V转移2 h或40 V转移3 h（可能会有比较大差别，我们实验室一般200 mA（约70 V）转膜15 min就可以了，20 min有的转过了，有次转了1小时，全都投过去了）。转完后将膜用1×...
1. 样品准备：蛋白质提取：从细胞或组织中提取蛋白质，通常使用含有去污剂和蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液。蛋白质定量：使用Bradford法、BCA法或Lowry法等对提取的蛋白质进行定量。2. 蛋白质电泳：制备SDS-PAGE凝胶：根据蛋白质的分子量选择合适的凝胶浓度。加样：将蛋白质样品与上样缓冲液混合后，上样至凝胶中。电泳...
蛋白质免疫印迹(WB)实验步骤主要包括以下几个环节: 准备:明确所检测目的蛋白的表达情况,通过文献或在线数据库了解蛋白特点,正确选择和处理样本。 蛋白提取:在冰上操作以减少蛋白降解,选择适当的裂解液和破碎方法,进行蛋白质定量分析,常用BCA法。 SDS-PAGE:根据蛋白质的大小分离蛋白质,使用凝胶电泳将蛋白拉过凝胶分开。
一、WB实验的基本原理：蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。与Southern或Northern杂交方法...
步骤: 一、试剂准备 二、蛋白样品制备 三、蛋白含量的测定 四、SDS - PAGE电泳 五、转膜 六、免疫反应 七、化学发光,显影,定影 八、凝胶图象分析 实验准备 实验材料:蛋白质样品。 试剂、试剂盒:裂解液 PBS G 250考马斯亮蓝溶液 NaCl SDS上样缓冲液 电泳缓冲液 转移缓冲液 丽春红染液 封闭液 TBST TBS 洗脱...
WB实验流程|超详细实验步骤,小白教程蛋白免疫印迹(Western Blotting)是将电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定蛋白的一种蛋白质检测技术。 #医学生#硕博#SCI#研究生的日常 # - 科研ICE于20240611发布在抖音,已经收获了31个喜欢
免疫印迹（Western blot）实验是一种常用的生物化学分析方法，用于检测和分离蛋白质。以下是免疫印迹实验的一般步骤：1.组织或细胞裂解：将需要检测的细胞或组织样本进行裂解，以释放蛋白质。常用的裂解缓冲液包括RIPA缓冲液和NP-40缓冲液等。2.蛋白质浓度测定：使用蛋白质浓度测定方法（如BCA或Bradford法）确定样品中的...
蛋白质印迹法（Western Blotting）的6个基础步骤：1.样品制备2.通过凝胶电泳分离蛋白质 3.蛋白质转移（电印迹）到膜上 4.膜封闭 5.免疫检测6.靶蛋白显印 WB法可用于检测天然和合成来源的蛋白质。来自表达系统的重组蛋白和来自生物样品的内源蛋白都可以用蛋白质印迹法检测。对于要通过WB分析的蛋白质，首先必须要...