依赖萤光素酶的化学发光特性，利用闪烁计数器可以对萤光素酶的活性定量检测。在标准条件下，底物过量时，固定时间内，萤光闪烁次数与样品中萤光素酶的活性成正比，因此可通过记录闪烁次数来评价萤光素酶的活性。另外,通过光自显影法也可以对萤光素酶进行定性检测。通用的方法还是通过萤光测定仪（化学发光仪）测定过程中释放的
发光反应的核心是萤光素酶,这种酶能催化底物萤光素的氧化反应。反应需要氧气、镁离子和三磷酸腺苷(ATP)参与。当萤光素与ATP结合形成活化中间体后,萤光素酶会促进其与氧气的结合,生成氧化萤光素并释放出光子。光子的波长通常在550-580纳米,呈现黄绿色,这也是萤火虫发光颜色的来源。 反应的关键成分中,ATP的作用尤为重...
在生物医学领域,萤光素酶基因作为报告基因已实现商业化,Promega公司开发的pGL4载体系统将检测灵敏度提升300倍。环境监测中,美国EPA批准基于该酶的急性毒性检测方法,检测重金属污染物响应时间缩短至15分钟。食品安全领域,欧盟建立ATP生物发光法检测微生物污染,较传统培养法提速48小时。这些应用暴露出现有技术的局限性:酶的...
萤光素酶能催化底物萤光素的转化，并发射出光子。海肾萤光素酶跟萤火虫萤光素酶类似，也是一胞内蛋白，但是它从海肾中分离得到，大小为36kDa，发光作用原理也稍简单：海肾萤光素酶只需要氧气就可以催化腔肠素（反应底物），氧化生成高能产物coelenteramide，并发出蓝光，最强发光波长为480nm。其作用反应式为如图2，海...
在相应化学反应中，荧光的产生是来自于萤光素的氧化，有些情况下反应体系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。没有萤光素酶的情况下，萤光素与氧气反应的速率非常慢，而钙离子的存在常常可以进一步加速反应（与肌肉收缩的情况相似）。检测样品 氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶、连接酶等。检测项目 发光法、活性...
1.具有酶活性(信号放大能力 2.蛋白小 3.没有内源性表达，背景低 4.易于定量 5.高灵敏度、线性范围宽 6.反应迅速 三，萤光素酶 在生物医药行业最主要的报告基因为荧光素酶报告基因。最常见的荧光素酶 （luciferase）基因来源于萤火虫。萤火虫萤光素酶在ATP、氧气和Mg2+存在条件下，催化萤光素的氧化羧化，释放...
基于免疫反应原理可构建萤光素酶免疫生物传感器。基因工程技术助力改造萤光素酶以满足不同检测需求。萤光素酶生物传感器能快速检测环境中的污染物。检测食品中的微生物也可借助萤光素酶生物传感器。 在医疗诊断领域它对疾病标志物检测有重要作用。萤光素酶的稳定性影响生物传感器的使用寿命。合适的缓冲体系是维持萤光素酶...
萤光素酶(Luciferase)是一类能催化产生生物发光的酶的统称,不同来源的萤光素酶各有特点,可催化底物发出不同颜色的光。 萤火虫萤光素酶荧光蛋白和萤光素酶的区别 荧光蛋白并不是自身发光,需要激发光源才可以生成激发荧光的,检测不需要底物,但激发光会引起背景荧光干扰。 萤光素酶通过催化底物产生化学发光,需要加入底物...
1.确定使用的萤光素酶 常见的萤光素酶有萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase,Fluc),海肾萤光素酶(Renilla luciferase,Rluc),Gaussia萤光素酶。它们在特定的条件下都可以催化各自的底物发出对应的光,这个过程无需激发器激发。其中,Fluc是使用最广泛的萤光素酶。这里我们就选择它为大家介绍其活体成像应用全流程。
研究发现,不少昆虫都有类似萤光素的蛋白质,可大多数因为缺少萤光素而无法发光。此外,虽然萤火虫都有萤光素酶基因,但部分种类发育的某些阶段(如成虫)或某个性别(如雄成虫),这个基因被关闭或者表达能力变弱,无法产生萤光素酶或者产生的萤光素酶过少,也会导致萤火虫不能发光或发光较弱。萤火虫对环境要求较高,生态环境...