本研究中双荧光素酶报告基因检测实验验证启动子活性是按照如下组合进行测定的：阳性对照：GAL4DBD-VP16和GAL4报告载体共转化原生质体；阴性对照：GAL4DBD和GAL4报告载体共转化原生质体；实验组：GAL4DBD-GhGT23和GAL4报告载体共转化原生质体。7验证特定转录因子与其调控启动子之间的作用 植物生长和发育由多种转录因子...
a.启动子结构分析，将启动子区域序列（通常2k左右）进行分段截短，或对特定位点进行突变，再分别构建入luciferase报告载体，检测其启动子活性。b.启动子SNP分析，一些基因的启动子区域存在单核苷酸多态性，可运用荧光素酶报告系统分析其相对活性。c.验证特定转录因子同其调控序列的作用，将该序列（通常为启动子区域）插...
c. 选择活性较高,处于指数分裂期的细胞进行转染。 启动子活性低或诱导失败 a. 转染后的细胞培养使用特异性诱导启动子的条件; b. 优化细胞的培养条件,提高荧光素酶的表达量; c. 更换强启动子(如SV40、CMV)。 注:海肾荧光素酶基因作为内对照,其表达应不受时期、部位、环境影响,因此常用组成型表达的TK启动子。
而荧光素酶的蛋白表达量,又和启动子活性、mRNA的稳定性及翻译效率等有关。利用这个特点,将待测启动子、UTR等序列与荧光素酶ORF框融合表达,再检测其发光强度,就能判断这些序列对蛋白表达的影响。这就叫荧光素酶报告基因检测。为了减少实验误差,一般会同时转染一个能稳定表达荧光素酶的质粒作为内参,所以叫双荧光素酶...
双荧光素酶报告基因实验依赖于两种生物体内自然存在的荧光素酶,它们可以催化特定底物发光。实验中,F-Luc通常用作主要报告基因来评估目标启动子活性,而R-Luc则作为内部控制,帮助校正实验的变异,如细胞数量和转染效率等。通过比较两种酶的相对活性,研究者可以得到关于基因表达调控的可靠信息。 ...
1、启动子活性分析；2、启动子SNP分析；3、启动子结构分析；4、microRNA与mRNA互作分析；5、microRNA与lncRNA互作分析；6、转录因子与启动子互作分析；7、转录因子转录活性分析。优势特点 1、采用我司已被授权的国际PCT专利技术（专利号：US 10,144,936 B2）来进行载体的构建，且该组装为无缝组装；2、载体资源...
荧光素酶报告基因分析可以有效地在体外评估转录因子调控启动子的能力。对于转录因子与启动子互作验证,目前普遍采用基于pGL3-basic载体的双荧光素酶报告基因系统。当然,如果目的启动子活性较强,使用pGL3-basic即可;若启动子活性较弱,可以选择带有强启动子的pGL3-enhancer或promoter载体。pGL3-basic系统需要用到三种质粒: ...
荧光值越高，通过FLuc与RLuc的比值，即可判断该转录因子对该启动子具有转录激活活性或转录抑制活性（如图...
(1)构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒,如pGL4.0-basic等。 (2)将要检测的转录因子表达质粒或者你认为影响该启动子活性的物质与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果能够激活靶启动子,则荧光素酶基因就会表达增强。
首先,启动子双荧光素酶报告基因技术是建立在荧光素酶酶活性检测原理的基础之上的。荧光素酶(luciferase)是一种广泛应用于生物学研究的标记物质,它通过氧化反应产生可见光。荧光素酶酶活性检测体系中含有荧光素底物,当荧光素底物被酶催化氧化时会产生可见光,其强度与荧光素酶的活性成正比。 在启动子双荧光素酶报告基因...