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素酶报告基因确定核心启动子的方法,包括以下步骤:步骤1:构建含7段不同长度MSTN基因5′调控区片段的pGL3-basic-MSTNpro重组体;步骤2:进行目标细胞的培养和铺板;配制步骤1所述pGL3-basic-MSTNpro与脂质体的混合物,用海肾荧光素酶载体pRL-TK为内参,进行细胞共转染;步骤3:用双荧光素酶报告基因进行荧光素酶活性检测....
双荧光素酶报告基因实验 * 技术原理荧光素底物在荧光素酶作用下会发光,且光强度能反应荧光素酶的蛋白表达量。而荧光素酶的蛋白表达量,又和启动子活性、mRNA的稳定性及翻译效率等有关。利用这个特点,将待测启动子、UTR等序列与荧光素酶ORF框融合表达,再检测其发光强度,就能判断这些序列对蛋白表达的影响。这就叫...
目的 构建人表面活性物质蛋白-B (SP-B)基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒,并分析其在H441细胞中的转录活性.方法 (1)以人基因组DNA为模板,PCR扩增SP-B启动子(-218/+435 bp)序列片段,并通过TA克隆方法连接到pGM-T载体上,筛选阳性克隆将目的片段进行测序.测序鉴定正确后的目的片段被克隆到荧光素酶表达载体 ...
荧光素酶报告基因检测的原理是通过检测荧光素酶的活性来反映基因表达的情况,将荧光素酶基因与目的基因或其调控元件(如启动子、增强子、3’UTR等)连接在一起,构建成报告基因载体,转染或转化到目标细胞或生物中。当目的基因或其调控元件受到内外因素的影响而发生表达变化时,相应地也会影响荧光素酶基因...
荧光素酶(Luciferase)是生物体内催化荧光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化发光的一类酶的总称,来自于自然界能够发光的生物。荧光素酶报告基因是指以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光。荧光素和荧光素酶...
1.一种利用双荧光素酶报告基因检测启动子活性的方法,其特征在于:包括以下步骤: 步骤1:根据牛MSTN基因5′调控区序列设计7组两端引物,以基因组DNA为模板,利用PCR反应进行扩增,获得7个不同长度MSTN基因5′调控区片段;对7个不同长度MSTN基因5′调控区片段进行酶切及纯化;再将7个不同长度MSTN基因5′调控区片段与所...
双荧光素酶报告基因介绍 学生:刘艳玲 导师:陈小平研究员 日期: 双荧光素酶报告基因实验介绍 简介 双荧光素酶报告基因实验是常用的 检测 miRNA 与靶基因结合、转录调 控和启动子活性的实验。 荧光素酶是生物体内催化荧光素或 脂肪醛氧化发光的一类酶的总称, 来自于自然界能够发光的生物,例....
素酶报告基因确定核心启动子的方法,包括以下步骤:步骤1:构建含7段不同长度MSTN基因5′调控区片段的pGL3-basic-MSTNpro重组体;步骤2:进行目标细胞的培养和铺板;配制步骤1所述pGL3-basic-MSTNpro与脂质体的混合物,用海肾荧光素酶载体pRL-TK为内参,进行细胞共转染;步骤3:用双荧光素酶报告基因进行荧光素酶活性检测....
本发明提供一种利用双荧光素酶报告基因检测鸭IFNβ启动子活性的方法,包括以下步骤:A,构建含鸭IFNβ启动子靶序列的萤火虫荧光素酶重组质粒;B,将含鸭IFNβ启动子靶序列的萤火虫荧光素酶重组质粒与刺激物,内参质粒及脂质体预混后转染目标细胞;所述内参质粒为海参荧光素酶质粒;C,将转染后的目标细胞进行培养后裂解,...