荧光原位杂交实验(FISH) 荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization FISH)是一门新兴的分子细胞遗传学技术,是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗...
与传统的放射性标记原位杂交相比,荧光原位杂交具有快速、检测信号强、杂交特异性高和可以多重染色等特点,因此在分子细胞遗传学领域受到普遍关注。 杂交所用的探针大致可以分类三类:1)染色体特异重复序列探针,例如α卫星、卫星III类的探针,其杂交靶位常大于1Mb,不含散在重复序列,与靶位结合紧密,杂交信号强,易于检测;2...
🧬FISH实验,全称荧光原位杂交实验,是一种强大的分子生物学技术。它利用已知序列的特异性单链核酸作为探针,这些探针被标记了生物素或荧光素。💡在特定的温度和离子浓度下,通过碱基互补配对法则,DNA-DNA进行原位杂交。然后,采用荧光法显示,最终将DNA在细胞爬片、组织切片(石蜡切片或冰冻切片)的原始位置上标记出来。...
变性和杂交是本实验最关键的步骤,变性的时间和温度是杂交成功是否的关键,变性和退火温度对荧光信号影响较大,变性和退火温度过低会导致杂交效率变低,使荧光信号变弱,变性和退火温度过高易出现高背景。 为保证变性期间温度的稳定,建议采用专业的原位杂交仪进行变性和杂交步骤,不仅能够减少实验的繁琐性,而且更有利于实验条...
🌀 预杂交:用5×SSC(PH=7.5)洗两次,每次1min。切片放置湿盒内,用预杂交液覆盖组织,65℃预杂交1h。 🔬 杂交反应:用100u M的探针母液1:500—1000稀释,FITC-labeled probe覆盖切片,在杂交仪内62-70℃黑暗反应24~72h,反应温度与反应时间视不同的组织与探针而定,建议一般65℃48h。
杂交:将已变性或预退火的探针10 μL滴于已变性并脱水的玻片标本上,盖上18×18盖玻片,用Parafilm封片,置于潮湿暗盒中37℃杂交过夜(为防止杂交液蒸发,此过程在湿盒中进行)。 洗涤:将已杂交的玻片标本放置于已预热42～50℃的体积分数50%甲酰胺/2×SSC中洗涤3次,每次5 min。然后在已预热42～50℃的1×SSC中洗涤...
核酸杂交是以碱基互补为基础、以双链核酸分子在特定条件下的变性和复性为手段,对核酸分子进行定性和定量检测。两条互补的核苷酸单链在特定条件下退火形成异质双链;应用荧光标记的探针与待检测材料中的单链核酸进行特异性结合,形成可悲检测的杂交双链核酸。在显微镜下观察并记录结果。 本实验所用探针是位点特异性标记探...
FISH的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针,按照碱基互补的原则,与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合,形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列,因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。与传统的放射性标记原位杂交相比,荧光原位杂交具有快速、检测...
（1）免疫酶联）（2）荧光原位杂交（Fluorescenceinsituhybridization,FISH)）荧光原位杂交（**同位素原位杂交的不足之处：同位素原位杂交的不足之处：同位素原位杂交的不足之处 1）不稳定；）不稳定；2）高背景；）高背景；3）曝光时间长；）曝光时间长；4）结果统计学处理繁琐。）结果统计学处理繁琐。5）同位素的...