杂交:将已变性或预退火的探针10 μL滴于已变性并脱水的玻片标本上,盖上18×18盖玻片,用Parafilm封片,置于潮湿暗盒中37℃杂交过夜(为防止杂交液蒸发,此过程在湿盒中进行)。 洗涤:将已杂交的玻片标本放置于已预热42～50℃的体积分数50%甲酰胺/2×SSC中洗涤3次,每次5 min。然后在已预热42～50℃的1×SSC中洗涤...
探针的荧光素标记可以采用直接和间接标记的方法。间接标记是采用生物素标记DNA探针,杂交之后用藕联有荧光素亲和素或者链霉亲和素进行检测,同时还可以利用亲和素-生物素-荧光素复合物,将荧光信号进行放大,从而可以检测 500bp 的片段。而直接标记法是将荧光素直接与探针核苷酸或磷酸戊糖骨架共价结合,或在缺口平移法标记...
下面将详细介绍荧光原位杂交的具体步骤和相应的详细说明。 1.细胞准备 首先,需要准备细胞样本。可以选择使用原代细胞,细胞悬液或切片等。 2.固定 将细胞固定在载玻片或载玻片上面。固定通常使用的试剂是乙酸乙酯和甲醇的混合物,通常比例为1:3 3.水合 将载玻片中的组织或细胞水合处理。这一步可以通过将载玻片浸泡...
荧光原位杂交(FISH)实验步骤仪器设备 1、医用微波炉; 2、水浴锅; 3、OLYMPUS BX51荧光显微镜; 4、OLYMPUS DP11数字显微照相机。 FISH试剂 (1)1×PBS:由10×PBS溶液稀释而成,储存于4℃; (2)20×SSC(pH7.0); (3)2×SSC,由20×SSC溶液稀释而成; (4)25mg/ml蛋白酶K消化液。 (5)变性液(70%甲酰胺+...
荧光原位杂交(FISH)实验步骤FISH(原位杂交)SOP流程 ---探针直接带荧光标记 一、FISH实验步骤 1、石蜡切片脱蜡至水:将挑选好的组织切片置于切片架上放入烘箱中65℃烤片2-3h(观察组织周围石蜡是否被熔化流至切片边缘),烤片完成后将组织切片放入脱蜡机中脱蜡。脱蜡完成后取出切片,进行抗原修复。 2、抗原修复:脱蜡完成...
荧光原位杂交(FISH)实验步骤详解 荧光原位杂交(FISH)是一种利用荧光探针的技术,通过与染色体特定位点结合来检测特定DNA序列的位置和时间。荧光探针是用荧光基团标记的核酸,可以与特定的DNA/RNA序列结合。FISH技术最初在20世纪80年代初被开发出来,而荧光显微镜则用于检测荧光探针与染色体的结合位置,流式细胞术则用于定量检...
荧光原位杂交(FISH)实验操作步骤 FISH(Fluorescence In-Situ Hybridization)技术问世于 20 世纪 70 年代后期, 是在原来的同位素原位杂交技术基础上发展起来的。其基本原理是,按照两个核 酸的碱基序列互补原则,用特殊修饰的核苷酸分子标记 DNA 探针,然后将标记 的探针直接原位杂交到染色体或 DNA 纤维切片上,再与荧光素...
荧光原位杂交FISH实验步骤与方法FISH实验步骤 一、实验仪器: 荧光显微镜: 高速离心机:可达12000r/min 高压灭菌锅:160℃以上杀菌 恒温箱:为杂交提供恒定温度 恒温水浴锅 照相机(与荧光显微镜配套):荧光捕捉图片 二、试剂的配制: 1、0.2mol/ L (pH7.4磷酸缓冲溶液(PB 试剂为NaH2P04·2H20和Na2HP04·12H2O。 --...
11.荧光检测试剂稀释液:体积分数5% BSA 1mL,20×SSC 1mL,ddH2O 3mL,Tween20 5μL混合。 12.洗脱液:100 mL 20×SSC,加水至500 mL,加Tween20 500 μL。 荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization FISH)是一门新兴的分子细胞遗传学技术,是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来...