部分细胞本身LC3-I的基础水平就很低, LC3-I本身就很容易降解,也更易在SDS上样缓冲液中降解, 对反复冻融更为敏感。 目前的LC3抗体所检测的抗原表位都位于LC3的N端,由于PE基团结合可能导致N端区域的构象变化,使得抗体对LC3-II的亲和性更高,所以LC3-...
它的功能主要参与了自噬小体的形成, LC3前体分子被ATG4B剪去C端的5肽,裂解形成胞质形式LC3-I。然后被APG7L / ATG7激活,转移至ATG3并偶联脂酰乙醇胺(PE)以形成膜结合形式LC3-II它可以附着到自噬体(autophagosome)的膜上,是自噬体的结构蛋白。怪不得文献中涉及自噬的都会做LC3...
LC3-II 的含量和发生自噬的程度成正比，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。得益于荧光蛋白技术的发展，我们可以通过荧光蛋白标记的方式，直观的看到自噬现象和过程。自噬病毒工具，便于直接感染目的细胞后直观地观察细胞自噬的整体水平。自噬单荧光标记慢病毒 吉满自主研发出单荧光(绿光或红光)标记的自噬指示产品...
艾美捷Cell Biolabs的细胞自噬ELISA试剂盒(LC3-II Quantation)是一种用于检测和定量培养细胞中LC3的酶免疫分析。该试剂盒利用选择性渗透程序去除胞浆前LC3和LC3-I,并保留自噬体膜结合的LC3-II(图1)。在固定和透化后,用抗LC3抗体探测含有LC3-II的细胞,然后用HRP缀合的第二抗体探测。每个试剂盒提供足够的试剂来进...
包括两种可相互转化的形式即LC3-I和LC3-II,参与了自噬体膜的形成。Atg4切割早期合成的pro-LC3暴露C端甘氨酸形成胞浆可溶形式的LC3-I。诱导自噬后,LC3-I在类E1酶Atg7、类E2酶Atg3以及类E3酶Atg5-Atg12-Atg16L复合物的共同作用下与自噬体膜表面的底物PE偶联,形成膜结合形式的LC3-II。LC3-II是自噬体的重要标志...
LC3-I通过Atg7 和 Atg3(分别对应 E1 和 E2 样酶)参与的泛素样反应,使磷脂酰乙醇胺 (PtdEth,PE) 偶联,生成脂质化形式的 LC3,也称作 LC3-II,它可以附着到自噬体(autophagosome)的膜上,是自噬体的结构蛋白。在降解过程中,位于自噬溶酶体外膜的LC3-II被半胱氨酸蛋白酶Atg4B移除后回收,位于内膜的LC3-II则与...
LC3-I通过Atg7 和 Atg3(分别对应 E1 和 E2 样酶)参与的泛素样反应,使磷脂酰乙醇胺 (PtdEth,PE) 偶联,生成脂质化形式的 LC3,也称作 LC3-II,它可以附着到自噬体(autophagosome)的膜上,是自噬体的结构蛋白。在降解过程中,位于自噬溶酶体外膜的LC3-II被半胱氨酸蛋白酶Atg4B移除后回收,位于内膜的LC3-II则与...
1. LC3 I和LC3 II:LC3是一种在自噬过程中参与的蛋白质。它存在两种形式:LC3 I和LC3 II。LC3 I是未修饰的形式,而LC3 II是经过磷酸化和脂化修饰的形式。LC3 II在自噬过程中会转移到自噬体膜上,因此LC3 II的水平可以反映自噬的活性。 2. 免疫印迹法:常用的检测LC3的方法是免疫印迹法。首先,需要制备细胞提取...
2. 自噬体的扩张：ATG12-ATG5-ATG16复合体、LC3-II的形成 当自噬前体形成后，随着自噬的进程，其将会扩张、延伸、走向成熟，形成自噬体。而这一阶段主要由两个泛素样反应系统催化。首先是第一个，ATG12在ATG7（E1）/ATG10（E2）的激活催化下，与ATG5结合，然后与ATG16非共价结合形成ATG12-ATG5-ATG16复合物，...
① 利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成(图1)。自噬形成时,胞浆型LC3-I会酶解掉一小段多肽,随后跟PE结合转变为膜型的LC3-II。因此可以通过LC3-II/I比值的大小估计自噬水平的高低。 图1. WB检测自噬通量示意图(Yoshii, S.R. and N. Mizushima. Int J Mol Sci, 2017.) ...