LC3/Atg8 被 Atg4 剪切掉 C 端 5 肽,暴露甘氨酸残基,产生定位于胞浆的 LC3-I。在自噬过程中,LC3-I 会被包括 Atg7 和 Atg3(分别对应 E1 和 E2 样酶)在内的泛素样体系修饰和加工,与磷脂酰乙醇胺(PE)相偶联,形成 LC3-II 附...
自噬形成时，胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即LC3-II），因此可利用WB检测LC3-II/I比值的变化以评估自噬的强弱。此外自噬衔接物如sequestosome 1（SQSTM1，也称为p62）也可用于检测自噬，p62蛋白水平的多少与自噬强弱有着反比例关系。2.3荧光蛋白标记检测 2.3.1 GFP-LC3 ...
部分细胞本身LC3-I的基础水平就很低, LC3-I本身就很容易降解,也更易在SDS上样缓冲液中降解, 对反复冻融更为敏感。 目前的LC3抗体所检测的抗原表位都位于LC3的N端,由于PE基团结合可能导致N端区域的构象变化,使得抗体对LC3-II的亲和性更高,所以LC3-...
线粒体自噬时,内质网膜包裹损伤的线粒体形成自噬体,此时LC3-I蛋白被修饰形成LC3-II蛋白,LC3-II蛋白促使自噬体与溶酶体融合,完成损伤的线粒体降解。研究人员选取
LC3-II 的含量和发生自噬的程度成正比，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。得益于荧光蛋白技术的发展，我们可以通过荧光蛋白标记的方式，直观的看到自噬现象和过程。自噬病毒工具，便于直接感染目的细胞后直观地观察细胞自噬的整体水平。自噬单荧光标记慢病毒 吉满自主研发出单荧光(绿光或红光)标记的自噬指示产品...
1. LC3 I和LC3 II:LC3是一种在自噬过程中参与的蛋白质。它存在两种形式:LC3 I和LC3 II。LC3 I是未修饰的形式,而LC3 II是经过磷酸化和脂化修饰的形式。LC3 II在自噬过程中会转移到自噬体膜上,因此LC3 II的水平可以反映自噬的活性。 2. 免疫印迹法:常用的检测LC3的方法是免疫印迹法。首先,需要制备细胞提取...
2. 自噬体的扩张：ATG12-ATG5-ATG16复合体、LC3-II的形成 当自噬前体形成后，随着自噬的进程，其将会扩张、延伸、走向成熟，形成自噬体。而这一阶段主要由两个泛素样反应系统催化。首先是第一个，ATG12在ATG7（E1）/ATG10（E2）的激活催化下，与ATG5结合，然后与ATG16非共价结合形成ATG12-ATG5-ATG16复合物，...
LC3-I 通过 Atg7 和Atg3(分别对应 E1 和 E2 样酶)参与的泛素样反应,使磷脂酰乙醇胺 (PtdEth,PE)偶联,生成脂质化形式的 LC3,也称作 LC3-II,它可以附着到自噬体(autophagosome)的膜上,是自噬体的结构蛋白。在降解过程中,位于自噬溶酶体外膜的 LC3-II 被半胱氨酸蛋白酶 Atg4B 移除后回收,位于内膜的 LC3-II...
自噬相关蛋白LC3是细胞内自噬过程中的关键标志物。以下是关于自噬相关蛋白LC3的详细解释：定义与全称：LC3，全称为自噬相关蛋白LC3，是细胞内自噬活动的重要标记。功能与作用：自噬过程的关键：当细胞进行自噬，即分解自身结构以回收利用物质时，LC3起着至关重要的作用。LC3I与LC3II的转化：胞浆中的LC3I会...