考马斯亮蓝G-250分子通过范德华力、疏水作用等次级键与蛋白质中的碱性氨基酸相互作 用,两者互作的结果使G-250分子的最大光吸收从465nm转移至595nm。在一定的蛋白质 浓度范围内,由于G-250与蛋白质结合产物的最大光吸收与蛋白质含量成正比,因此,可 以通过测定G-250和蛋白质结合产物在595nm的最大光吸收来确定蛋...
考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)染料,在游离状态下溶液呈棕红色,当它与蛋白质结合后变为蓝色。蛋白质含量在0~1000μg范围内,蛋白质-色素结合物在595nm下的吸光度与蛋白质含量成正比,故可用比色法进行定量分析。考马斯亮蓝G-250法(Bradford法)是比色法与色素法相结合的复合方法,简便快捷,灵...
蛋白质含量测定(考马斯亮蓝G-250法)一、目的 考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue) G-250法是比色法与色素法相结合的复合方法，由Bradford于1976年建立，具有简便快捷，灵敏度高，稳定性好等特点，是一种较好的蛋白质定量测定常用方法。通过本实验学习应用该法测定蛋白质含量的原理，复习分光光度计的使用及标准...
实验三实验三 蛋白质含量的测定蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝考马斯亮蓝 G250 染色法染色法) 原原 理理 考马斯亮蓝 G250 测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝 G250 在游离状态下呈红色,当它与蛋白质结合后变为青色,前者最大光吸收在 465nm,后者在 595nm。在一定蛋白质浓度范围内(0～1000...
它对蛋白质的检测范围通常在1 1000μg/mL之间,对于含量过低或过高的蛋白质样品,可能不太适用。同时,该方法对一些小分子多肽的检测灵敏度相对较低。 总的来说,考马斯亮蓝G250法是一种简便、有效的蛋白质含量测定方法,在科研和实际应用中发挥着重要作用。但在使用过程中,需要充分了解其原理和影响因素,以确保测定...
解析 蛋白质所测的OD值一定要位于标准曲线范围内,因为G-250的曲线随着蛋白浓度增高有些略微偏离线性,若蛋白质浓度太高,可适当稀释后再测.此外,用于标准样品的牛血清白蛋白组分V最好现配现用,已经配好的溶液即使是-20度保存一段时间后也会造成你的结果偏高....
蛋白质含量在0~1000μg范围内,蛋白质-色素结合物在595nm下的吸光度与蛋白质含量成正比,故可用比色法举行定量分析。考马斯亮蓝G-250法(Bradford 法)是比色法与色素法相结合的复合办法,简便快捷,敏捷度高,稳定性好,是一种较好的蛋白质常用分析办法。
考马斯亮蓝染液(ml) 5 5 A595 0.451 0.463 蛋白质含量(μg) 五、数据处理 1、将测得的吸光度填入上表中,并根据数值作出标准曲线。 2、计算公式:样品中的蛋白质含量(μg/g鲜重)={[查得的蛋白质含量(μg)]×稀释倍数}/ [样品鲜重(g)] 六、注意事项 1、如果要求严格,最好在试剂加入后的5~20min内...
考马斯亮蓝液/ ml )( 5.0 )( 5.0 )( 5.0 )( 5.0 )( 5.0 )( 5.0 ) 加入考马斯亮蓝G-250蛋白试剂后,摇匀,放置2min后,在595nm波长下比色测定,记录A595。 以各管相应标准蛋白质含量(昭)为横坐标、A595为纵坐标,绘制标准曲线。 2、绿豆芽蛋白质样品的制备 ...