3) 消化好的腺病毒表达载体转染 293A 细胞,收获细胞以制备病毒粗提液。 4) 将病毒粗提液感染 293A 细胞以扩增病毒。 5) 分装,-80℃保存。 1.3、慢病毒和腺病毒的比较 慢病毒载体系统和腺病毒载体系统比较 病毒表达系统 慢病毒表达系统(Lentivirus) 腺病毒表达系统(Adenovirus) 病毒基因组 RNA病毒 双链DNA病毒...
1. 准备病毒和细胞：首先，需要准备适量的病毒和适宜的宿主细胞。常用的宿主细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞和植物细胞等。2. 病毒接种：将病毒接种于适宜的宿主细胞中，通常使用吸管或移液器将病毒液加入培养皿或培养瓶中的细胞培养基中。接种时需控制病毒的感染剂量和感染时间。3. 观察和记录：在病毒接种后，需要...
文库病毒感染细胞流程 （6）扩增细胞，待细胞扩增到一定程度，以文库sgRNA的1000×细胞数进行保种冻存。一部分细胞收细胞团用作day质控（用于提取基因组，细胞数为文库sgRNA的50×），一部分细胞用作筛选（细胞数为文库sgRNA的500×），筛选分为对照组和实验组，对照组加DMSO，实验组加合适浓度的药物（药物浓度需...
在冰上操作,用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)稀释病毒,然后分装并放在4度保存。⚠️注意:避免反复冻融,因为每次冻融都会降低病毒滴度(每次冻融大约降低10%~50%)。 预实验——摸索合适的MOI🔍 MOI(感染复数) MOI即每个细胞被多少个有活力的病毒所感染。通常MOI越高,目的蛋白的表达量越...
当细胞生长到一定密度时，可以进行接种。接种时，应将病毒样品与细胞混合，并确保病毒充分吸附到细胞表面。这一步骤是实验的关键，因为它决定了病毒感染的效率和后续实验的结果。三、感染与观察完成接种后，将细胞放回培养箱中继续培养。在感染过程中，应定期观察细胞的生长状况和形态变化。通过显微镜观察细胞的病变效应...
CRISPR/Cas9文库筛选技术可实现全基因组范围的高通量筛选,其针对每个基因设计3-10条sgRNA,利用芯片一次性合成数万条覆盖整个基因组的sgRNA探针,通过克隆构建载体库,经慢病毒包装后以低感染复数感染宿主细胞,…
巨细胞病毒感染是由人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)引起的人类感染性疾病。人巨细胞病毒感染在我国非常广泛,一般人群HCMV-IgG抗体阳性率为90%左右,孕妇为95%左右,婴幼儿期为60%-80%,原发感染多发生于婴幼儿期,一旦感染会持续终生。 HCMV是弱致病因子,...
1) 直接包装成为假病毒颗粒,对分裂和非分裂细胞均有感染作用,适合 RNAi 研究和体内实验中难于转染的细胞 (比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。 2) 可以通过简单方式,在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。 3) 可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。
五、慢病毒感染细胞 1、流程图 2、感染步骤 (1)铺板:将对数生长期的细胞消化重悬后,按1*105/L密度接种于12孔板,生长过夜 (2)感染:将70-80%铺满12孔板中的培养液吸除,换新鲜的培养液,同时加入PBS浓度梯度稀释的病毒液,混合均匀后即可放入孵箱培养。
二、常见的实验室检测方法 1.病毒分离培养法 诊断HCMV感染的“金标准”是体液中分离出巨细胞病毒。研究显示内皮细胞、上皮细胞和人胚肺成纤维细胞是HCMV感染的主要对象。而分离的传统方法则是将样本中的病毒接种到例如人胚肺成纤维细胞的敏感细胞中。由于HCMV增殖速度...