比例传代:取离心管弃去上清液,补加2ml培养基后吹打均匀,轻晃离心管将细胞悬液按1:2的比例分到新的培养基中,“8”字或米字摇晃培养皿使细胞均匀铺平。 培养细胞:将培养皿置于显微镜下观察情况,37℃培养过夜。 三、细胞冻存 ❄️ 配置冻存液:90%血清(10% FBS)+10% DMSO。 冻存准备:冻存盒提前复温,按...
以25 cm2 的培养瓶为例,向瓶内加入 1ml 胰蛋白酶-EDTA(请根据各细胞的指引使用合适的浓度)消化液,轻轻摇动培养瓶,使消化液流遍所有细胞表面,放到 37 ℃ 孵育。通常,几分钟内,会发现胞质回缩、细胞间隙增大,倾斜培养瓶时细胞层能自然流下,此时应加入 2-3ml 含血清的完全培养液终止消化(细胞解离所需时间请参...
细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 1. 细胞复苏的原则:快速融化 在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 2. 细胞复苏操作过程 ...
做好标记,注明细胞、代数、日期、培养人,轻轻摇匀后放入37°C、5%CO2的培养箱中培养。🌊 细胞复苏 从冷冻保存中取出细胞,迅速放入37°C水浴中解冻。 解冻后,将细胞转移到含有新鲜培养基的培养皿中。 轻轻摇动培养皿,使细胞均匀分布。 放入37°C、5%CO2的培养箱中培养。❄️ 细胞冻存 当细胞状态良好时,可...
复苏 细胞复苏的原则:快速融化 必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 实验前准备 1.将水浴锅提前预热至37℃。 2.细胞实验室进行常规消毒,用75%酒精擦拭紫外线照射40min的超净工作台台面,保证无菌。
复苏:将冻存的细胞迅速放入37℃水浴中快速解冻,避免反复冻融。 冻存:选择生长状态良好的细胞,按一定比例加入保护剂,缓慢降温后存入液氮。 传代:当细胞密度达到一定值时进行传代,注意消化时间和操作手法,避免对细胞造成损伤。通过这些操作和注意事项,可以更好地进行细胞培养实验,确保实验结果的准确性和可靠性。0...
1. 细胞复苏:指将冻存的细胞解冻之后重新培养,细胞恢复生长的过程。 复苏过程如下图所示: 常见问题解答: Q:为什么细胞复苏后,很多难以贴壁? A:忽略培养基的问题,主要考虑细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡。切记最重要的融化速度要快,可不时摇动冷冻管,使之尽快通过最易受损的温度段(-5～0℃)。
细胞冻存 1. 待细胞生长至可传代的密度，即可准备冻存。2. 消化细胞，取少量细胞悬液计数。细胞悬液经250 g离心4 min。3. 离心后去除上清，用适量4℃预冷的冻存液重悬细胞。将细胞按比例或数量分装至冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)×106个/mL。注意: 细胞长时间在非培养条件下放置会严重影响细胞...
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代。①弃去培养上清，用PBS或盐水清洗1-2次；②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱...
细胞复苏的原则-快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 具体操作: 一. 实验前准备: 1. 将水浴锅预热至37℃ 2. 用75%酒精擦拭紫...