下面是一般的切片免疫荧光染色的具体步骤: 步骤一:取样 步骤二:切片 将固定的组织样本或细胞样本进行切片处理。可以使用切片刀或者切片机来获得薄片。切片的厚度往往是几微米到几百微米。切片完成后,可以将其放在载玻片上。 步骤三:预处理 载玻片上的切片需要进行一些预处理步骤,以去除可能会影响后续染色的物质,如...
BrdU组织切片的免疫荧光染色步骤大致如下: 1.样本处理:将待检测的组织样本进行固定和切片。固定通常使用4%的多聚甲醛,时间一般为30分钟到1小时,以确保组织中的蛋白质和其他成分得到妥善保存。切片厚度通常为5-10μm,以便于后续的染色和观察。 2.DNA变性:由于BrdU已经掺入到DNA中,因此需要对DNA进行变性处理,使BrdU...
1️⃣ 首先,将脑组织切成40微米的OCT冰冻切片,每片放置在24孔板中,每个个体切3-4片。2️⃣ 在24孔板中加入多聚甲醛固定液,室温固定20分钟。3️⃣ 使用PBS清洗两次,每次10分钟(注意不要使用吸引泵吸走废液,以免将组织吸走)。4️⃣ 配制2% tritonX-100-10% donkey serum的PBS溶液,室温通透和封闭...
8.血清封闭：用吸水纸擦干玻片，免疫组画笔在组织周围画圈，滴加稀释好的正常山羊血清，室温封闭30min，以减少非特异性染色。9.一抗染色：甩去多余液体，不洗，然后滴加稀释好的一抗，4°C湿盒中孵育过夜。10.荧光二抗染色：PBST冲洗切片3次，每次3min，吸水纸擦干切片后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵...
石蜡切片免疫组化及免疫荧光染色方法 1、组织的采集、固定和保存: 采取组织后, 方法一:4%多聚甲醛(4%PFA)4°C 固定1小时(根据组织大小和致密程度调整固定时间)或过夜 方法二:采用bouin’s固定RT 2h(6-8d tesis)or RT 过夜(成年 tesis) PBS缓冲液洗三次,每次5min,4°C保存于70%乙醇中。
组织切片免疫荧光染色的具体步骤 1直接免疫荧光法的操作步骤 标本的处理: 石蜡切片经脱蜡、梯度酒精脱水后,进行抗原修复,然后用0。01M PBST漂洗5min × 3/次; • 2%BSA或10%BSA 37 C湿盒内封闭30min •抗体染色: C孵育30min;–在标本片上滴加适当稀释的荧光标记抗体(1:8或1:16稀释),放在湿盒中,37...
滴加荧光二抗以覆盖整个组织为宜,放入暗盒内避光室温孵育1h(注:此后所有步骤均需避光操作),孵育结束,用PBS缓冲液洗涤3次,每次5 min。 13.DAPI染色 采用DAPI染液室温避光染色10 min,用PBS洗涤3次,每次5 min。轻轻蘸干水分,滴加抗荧光衰减封片剂,盖上盖玻片。
按标记物种类:免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。 按染色步骤:直接法、间接法。 按结合方式:过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)、卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)。 我们按照标记物的种类,看一下常用的三种方法。
组织切片免疫荧光染色的具体步骤 1直接免疫荧光法的操作步骤 标本的处理: 石蜡切片经脱蜡、梯度酒精脱水后,进行抗原修复,然后用0.01M PBST漂洗5min × 3/次; • 2%BSA或10%BSA 37 C湿盒内封闭30min •抗体染色: C孵育30min;–在标本片上滴加适当稀释的荧光标记抗体(1:8或1:16稀释),放在湿盒中,37 ...