进行真核转染的一般程序: 克隆目的基因(经测序验证)-准备真核表达载体-将目的基因插入表达载体中-转染-筛选-鉴定下面以pcDNA3为载体,p16为目的基因,介绍真核转染的实验操作。 一、试剂准备 1、HBS(Hepes-buffered saline):876mg NaCl溶于90ml ddH2O,加入1M Hepes,调pH到7.4,补ddH2O至100ml,pH7.4,滤过除菌。
在MCF-7细胞系中,基因枪法成功介导了真核表达质粒pEGFP和Pmcherry的转染。转染后24小时,通过荧光显微镜观察到大量细胞发出绿色和红色荧光,表明外源基因已在细胞内成功表达。统计结果显示,转染效率达到约60%,荧光强度较高。 在COS-7细胞系中,基因枪法同样实现了真核表达质粒的高效转染。转染后24小时,荧光显微镜下观察...
1. 在6孔板中接种1~3×105细胞/孔,加入2ml完全培养基,置CO2孵箱中37℃培养过夜。 2. 待细胞长到50-80%单层时,在无菌离心管中配制如下溶液: i. 溶液A:将4?g待转染的超纯DNA稀释到250?l无血清培养基中,静置5min ii. 溶液B:将2-25?l LipofectAMINE 稀释到250?l无血清培养基中,静置5min 3. 混合溶...
产品名称 普利莱 DOTAP真核细胞转染试剂 产品规格 0.25ml 用途范围 科研实验研究 是否进口 否 储存条件 4℃ 保质期 12个月 是否现货 是 产地 中国 供货数量 100000 产品LOGO APPLYGEN 可售卖地 全国 型号 C1510-0.25 货号 C1510-0.25 价格说明 价格:商品在爱采购的展示标价,具体的成交价格可能因...
该试剂对细胞毒性很小,可在含血清与抗生素的完全培养液中充分发挥作用。对多数培养细胞种类都有较高的转染效率(不同种类细胞的转染效率可有明显差异)。此类试剂是目前非病毒介导方法中效率最高的转染试剂。 产品特征 特点: ◇高效、低毒、广谱; ◇操作简便;...
在真核表达体系中,细胞转染是将外源核酸导入细胞的关键技术,主要包括以下方式: 1. **磷酸钙转染法**:通过DNA与磷酸钙共沉淀形成复合物,被细胞吞噬。成本低但效率受pH和温度影响较大。 2. **脂质体介导转染**:利用阳离子脂质体包裹核酸,与细胞膜融合后释放内容物。操作简单且适用于多种细胞类型。 3. **电穿...
电穿孔法作为一种物理转染方法，通过施加短暂的高压电脉冲，在细胞膜上形成瞬时微孔，使带电荷的分子如DNA、RNA等能够进入细胞内。与其他转染方法相比，电穿孔法具有操作简便、适用范围广、转染效率高等优点。本研究旨在通过优化电穿孔参数，使用线性多核苷酸作为载体，增强真核细胞的转染效率和效果，为基因治疗、疫苗开发...
真核细胞转染的常用方法有( )真核细胞转染的常用方法有( ) A. 氯化钙转染 B. 超声波穿孔 C. 脂质体转染 D. DEAE纤维素介导转染 E. 以上都对 答案: C©2022 Baidu |由 百度智能云 提供计算服务 | 使用百度前必读 | 文库协议 | 网站地图 | 百度营销 ...
质粒dna转染真核包主要有以下两种方法：一、生化方法 1.磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞 1）转染前 24 h，通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞 /cm2的密度平铺细胞于60 mm组织培养皿或12孔板上。于含 5%～7% CO2的37℃温箱孵育20 ～24 h。转染前1 h换液。2） 按照下属方法...
当脂质体 - 核酸复合物与真核细胞接触时，主要通过以下几种方式实现基因转染：一是脂质体与细胞膜直接融合，将复合物中的核酸释放到细胞质中；二是通过细胞的内吞作用，复合物被摄入细胞内形成内体，然后在内体酸性环境的作用下，脂质体与内体膜融合，释放核酸到细胞质中，再进一步转运到细胞核内进行转录和翻译。三...