1. 📏 引物长度:理想的引物长度在18到24个核苷酸之间。较长的引物可能会与错误配对序列杂交,降低特异性,而且比短序列杂交慢,从而降低产量。 🌐 GC含量:选择GC含量为40%到60%的引物,或者GC含量与模板GC含量相近的引物。 🔄 5'端和中间区:设计5'端和中间区为G或C的引物,这会增加引物的稳定性和与目的序...
一般情况下QPCR引物尽量选择跨外显子设计这样可以避免因为提取RNA过程中基因组DNA没有去除干净引起的非特异...
一般情况下QPCR引物尽量选择跨外显子设计这样可以避免因为提取RNA过程中基因组DNA没有去除干净引起的非特异...
circRNA成环性检测在circRNA研究中非常关键,通常需要在剪切位点(back-spliced junction)处设计特异性的验证引物。由于已获取的序列为环序列从剪接位点处打开后的线性序列,而按照一般序列线性存储规则(5’至3’方向),为方便引物设计,需要复原序列成环时的位置关系,对序列进行位置变换后再进行设计,如图所示: 图片.png (...
首先,按照一般序列线性存储规则,默认按照5'→3'方向书写,为了便于进行引物设计,需先进行序列转换。截取3'端100-300bp长度序列置于5'端100-300bp长度序列前面形成一个新的序列。再拿这个新的序列在软件中按照常规方法设计引物,当然,还要确定引物的特异性,不断调试编辑上下游引物直到在NCBI中比对不到任何信息。
Primer-Blast介绍Primer-BLAST，在线设计用于聚合酶链反应（PCR）的特异性寡核苷酸引物。Primer-BLAST可以直接从Blast主页（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/）找到，或是直接用下面的链接进入：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/ 这个工具整合了目前流行的Primer3软件，再加上NCBI的Blast进行引物特异...
1、首先需要确定要扩增的目标基因或DNA序列。这通常是对益生菌进行分类、鉴定或检测所需要的特定基因或DNA片段。2、根据目标基因的序列，设计一对特异性引物。引物是PCR反应中用来引导DNA合成的短序列，通常为15-30个核苷酸。设计特异性引物的目的是确保引物能够特异性与目标基因而不是其他基因结合。3、...
检测的特异性 在大多数情况下,引物设计的目的是最大限度地提高PCR的特异性,这是由许多变量或多或少可预测的影响决定的,其中一个重要变量是引物3’端的序列。 重要的是,为特异性而设计的PCR测定更有可能在宽的动态范围内保持高效率,因为该测...
1. 引物长度：引物的最佳长度为24或25个碱基左右。但是如果需要调整Tm值，引物的长度可以控制在21至28个碱基之间。当扩增≥10 kb长片段时，25-35个碱基之间的引物可以提供更好的结果。引物过短，会降低产物的特异性，每增加一个核苷酸，引物特异性可以提高 4 倍。引物过长，会使退火过程不完全，与...
甲基化特异性PCR引物设计 甲基化特异性PCR 甲基化特异性PCR(MSP) 1. MSP原理:MSP是一种简便、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方式。其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因组DNA,未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变,然后用3对特异性的引物对所测基因的同一核苷酸序列进行扩增。扩增产物用DNA琼脂糖...