只能检测晚期凋亡DNA发生断裂的细胞,检测凋亡不多。 绿点表示未染色的细胞和红色表示TUNEL染色的细胞。 二、流式细胞术检测细胞因子 Cytometric Bead Array (CBA) :即微量样本多重蛋白定量技术,是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法,能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。如细胞培养液中细胞因子含量的...
细胞凋亡(apoptosis)是由基因调控的细胞程序性死亡的过程。凋亡细胞形态上表现出细胞核皱缩,细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻线粒体膜电位下降,染色质凝缩和DNA断裂等 实验原理 流式检测细胞凋亡常用FITC-Annexin V/PI检测试剂盒。在细胞凋亡早期PS外翻到细胞膜表面。Annexin-V是一种钙离子依赖的磷脂结合蛋白,它对PS具有较高的...
流式细胞仪检测细胞需要细胞活性好、单个分散,这样才方便实验过程中区分死亡、凋亡和正常细胞。组织在冻存解冻后会有大量细胞死亡、细胞活性下降、粘连破碎等问题,无法再上机检测。流式检测最好是用新鲜的刚取材的样本进行检测,数据准确,操作方便。 2 流式和 Tunel 染...
通过使用荧光标记的Annexin V(如Annexin V-FITC)与PI的联合染色,可以在流式细胞仪上同时检测PS的外翻和细胞膜的完整性,从而区分活细胞、早期凋亡细胞、中晚期凋亡细胞和坏死细胞。 1.材料 肿瘤细胞系、FALCON 管、EP管、吸头、移液器和400目滤网,胰酶、1XPBS、凋亡试剂盒 ...
四、基于流式细胞术的凋亡检测手段 PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测 PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生, 可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测(悬浮细...
异性) 104 通过使用荧光标记的AnnexinV(如AnnexinV-FITC)与PI的联合染色,可以在流式细胞仪 活细胞 7)上机检测。 上同时检测PS的外翻和细胞膜的完整性,从而区分活细胞、早期凋亡细胞、中晚期凋亡细胞 1具体分组: 12.8 50.7 怕狗核 晚期洞亡细胞 PS(磷脂感丝氨酸) 100 PS上,其结合不依赖于细胞是否处于凋亡状态,...
从凋亡的早期、中期到晚期,在流式上都有相应的方法可用枟检测。 1、早期凋亡: 线粒体膜电位 JC-1是一种广泛使用的线粒体膜电位检测阳离子染料,它可进入带负电荷的线粒体内聚积形成聚集体,并488nm荧光激发,发出以红光为主的光谱,故在FL1/FL2散点图...
流式细胞术检测细胞凋亡(FITC-PI) 1实验方法 1.用6孔板培养细胞,待细胞生长达到60%-70%,吸出旧培养基,根据实验需求处理,继续培养。 2.根据实验处理时间,把细胞培养液吸出至一合适离心管内,PBS洗涤贴壁细胞一次,加入适量胰酶细胞消化液消化细胞。室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶细胞消化液。
流式细胞术检测细胞凋亡 细胞早期凋亡检测方法Annexin V 一、备用试剂 1.结合缓冲液 (10X ): 0.1 M HEPES, pH 7.4; 1.4 M NaCl; 25 mM CaCl2 . 稀释到1X 工作液备用; 2.碘化丙碇Propidium Iodide (PI). 用PBS稀释到 50 μg/ml备用,建议与Annexin V-FITC联合使用; ...