常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞DNA含量(横坐标)来分析的: G1期:DNA复制还没开始,也是DNA含量最少的,即流式检测结果图的第一个峰; S期:DNA开始复制,到完成复制,是一个一倍DNA到二倍DNA的过程,在流式结果图中显示期跨度特别大(第二个不高但很...
由于其分子较大，无法穿透活细胞的完整细胞膜，因此只能进入膜完整性受损的细胞，如凋亡中晚期和坏死细胞。通过使用荧光标记的Annexin V（如Annexin V-FITC）与PI的联合染色，可以在流式细胞仪上同时检测PS的外翻和细胞膜的完整性，从而区分活细胞、早期凋亡细胞、中晚期凋亡细胞和坏死细胞。1.材料 肿瘤细胞系、FALCON ...
流式细胞术是一种很常见的实验方法,对于细胞周期来说,一般是采用经典的碘化丙啶(PI)染色的方法进行周期分析, PI可以和双链DNA结合产生荧光,荧光强度和DNA含量呈正比,因此,我们可以根据DNA含量的多少来进行细胞周期的分析。接下来以我个人做周期的经验来分享实验步骤及注意事项。 实验步骤 1.按照实验要求进行细胞铺板...
1、纵坐标Cell Number:即计数的有效细胞数; 2、横坐标DNA Content:即DNA含量; 3、常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞DNA含量(横坐标)来分析的; 4、G0/G1期:DNA复制还没开始,也是DNA含量最少的,即流式检测结果图的第一个峰; 5、S期:DNA开始复制,到完成复制,是一个一倍DNA到二倍DNA的过程,在...
在流式细胞术中,通过仅一个荧光通道进行DNA含量测定。使用荧光染料与细胞中的DNA结合,染料量与DNA含量成比例增多。当细胞的DNA含量增加时,结合的荧光染料就会增多,相应的荧光强度也会增强。这样,通过测定单个细胞的荧光强度,可以推算出其DNA含量,进而分析细胞周期状态。
流式周期检测上机操作、分析视频如下,以贝克曼CytoFLEX为例: 在此特别感谢CR7分享的周期检测的Video 4. 数据分析 最后分析结果可以以线段法进行展示(图A),或者将fcs格式数据导入到Kaluza分析软件(图B,上面视频中7′43″处)或者是Modfit软件中进行周期分析拟合(上面视频中10′05″处),最终获得G1,S,G2期的比例。
流式细胞周期检测中有许多需要注意的事项,来看 制备单细胞悬液:操作应轻柔,减少碎片,但消化要充分而不过度,保证细胞不粘连、不破裂,染色要充分; 最低速度上机检测:降低CV,避免仪器把相邻细胞当做一个细胞; 排除粘连体:避免细胞粘黏检测的DNA含量为非2倍体,导致实验结果不准确; ...
modifit软件 流式细胞周期数据 方法/步骤 1 打开modifit软件，点击【continue trail】进入使用版本，如果已经购买的用户可以进行【register】登录，点击【Ok】进入主界面。2 点击【file】，点击【open date】打开数据。3 选择【dateset 1】进行数据设置调整标准，点击【ok】。4 进行设门，gate1，横坐标【fsc】，纵...
PI可以与DNA结合,其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此,通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0 期,S 期和G2/M 期,获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。 PI,即碘化丙锭,可以...
细胞周期至少有两种做法，最常见的如下图分析：这个是BrdU和7-AAD方法检测细胞周期。红色的gate就是G1期，绿色的就是S期，橙色的就是G2/M期。BrdU, PI, 或者EdU方法和这个一样分析 如果单用PI等DNA染料染色，需要专业软件来分析计算了。比如这个图，是DNA染料单染，其中粉色部分是G1期，黄色部分是...