5）弃去上清液，加入300μL PI/RNase染色液，混匀后在避光条件下室温染色15分钟。使用400目筛网过滤单细胞悬液。6）上机检测 7）Modifit软件模拟检测结果 3.实验结果解读 上图是笔者自己做的流式周期实验 X轴（FL2-A PE-A）表示荧光强度，反映DNA含量。Y轴（Number）表示细胞数量。G1峰（深红色区域）：左侧的高峰，
2、2mL的预冷PBS洗细胞一次,离心再次获取细胞沉淀 3、染色:加入50μlRNA酶和250μl-450μlPI染色剂(用量根据试剂盒说明书),避光染色5-10min(一般加300μl,保证适当细胞浓度,浓度太高检测速度太快,结果不准;浓度太低检测速度太慢,时间太长) 4、上机检测 三、注意事项 1、流式细胞仪原理 非荧光信号 (1)前...
通过流式细胞术检测到的与DNA结合的PI的荧光强度直接反应了细胞内DNA含量的多少。由于细胞周期各时相的DNA含量不同,细胞周期可以分为分裂间期和分裂期(M),其中分裂间期又可分为DNA合成前期(G1)期,DNA合成期(S)期,DNA合成后期(G2)期,通常正常细胞的G0/G1期具有...
由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),而 G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ,而S期的DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。 PI可以与DNA结合,其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此,通过流式细胞仪PI染...
细胞周期检测原理归纳 细胞周期是指从一次细胞分裂形成子细胞开始到下一次细胞分裂形成子细胞为止所经历的过程,可反映细胞增殖的速度。 细胞周期由多个阶段组成,通常包括G1期(细胞大小增加)、S期(DNA合成和复制 )、G2期(细胞进一步生长),以及M期(有丝分裂和细胞分裂)、GO期(细胞静息休眠)。 在细胞周期的不同时期,...
四、基于流式细胞术的凋亡检测手段 PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测 PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生, 可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测(悬浮细胞...
图2.使用FxCycle Violet Ready Flow 试剂和 Invitrogen Click-iT EdU Alexa Fluor 647 流式细胞分析试剂盒进行细胞周期分析。先用 10 µM EdU 处理 Jurkat 细胞(人 T 细胞白血病细胞系) 2 小时,再使用 A...
流式细胞仪PI染色法检测细胞周期的原理：由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA含量(2N) ,而 G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ,而S期的DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此,通过流式细胞仪PI染色法对...
本文将对流式细胞术之细胞周期检测中的常见问题进行解析，以期为实验人员提供有益的参考。一、DNA含量异常在细胞周期检测中，有时会出现DNA含量异常的现象，如DNA含量偏低或偏高。这可能是由于染色体的异常变异、细胞坏死或凋亡等原因所致。实验人员需要注意甄别这些异常细胞，避免对正常细胞的周期分析造成干扰。二、非...
圈门逻辑:首先用前向(FSC)和侧向(SSC)圈出细胞群,再用荧光通道的W(宽度)/A(面积)去除粘连细胞,最后用荧光通道的柱状图分析细胞周期,图中所标a、b和c分别代表G0/G1 期细胞、S期细胞和G2/M 期细胞。 固定细胞PI染色法检测细胞周期 活细胞Hoechst 33342染色法检测细胞周期...