具体的步骤都是很繁琐的,而且每个实验都不尽相同。只能告诉你这些原则:第一步就是设计,你的分选标记是什么,如果是表面抗体标记,标记后会不会诱导细胞激活,会不会影响下游的实验,这些都要弄明白。第二步,选择你所要用仪器兼容的荧光素。比如你们实验室的仪器没有紫外激光,可是你选用了只有紫外荧光才能激发的荧光素...
流式分选基本步骤 将样品制备成单细胞悬液,尽量减少死细胞、细胞碎片和小颗粒性物质的比例 荧光素偶联抗体标记样品细胞,4℃静置30min。标记样品细胞的同时可以开始调节流式细胞仪 开启空气压缩机和负压泵,开启液流系统,然后“打点”可见液流 开启激光器,调节激光光路,使得激光正好穿过可见液流的正中央,保证最为理想...
以下是通常的流式细胞分选的步骤: 1.细胞准备:将待分选的细胞进行培养和增殖,直到细胞数量足够用于分选。此外,细胞也可以来源于个体的组织或血液。细胞样本应该处于单细胞悬浮状态,以确保每个细胞的分选准确性。 2.细胞标记:利用适当的荧光标记物标记细胞表面的特定分子或细胞内的组分。常用的标记物包括荧光染料和荧光...
流式分选细胞培养步骤 1.准备:消毒台面;穿戴工作服,帽子,口罩和手套,放置棉签,草纸和有盖垃圾桶(内装有消毒剂); 2.写编号纸并编号; 3.取出PMA(1∶100),BFA(1∶10)和离子霉素(1∶10),使用无菌无叠氮钠PBS稀释储存液; 4.刺激:取全血或PBMCs(细胞数在0.5-1 106)50l/管,再加入50l RPMI1640进行稀释一倍...
1、分选前应先做预实验,优化流式细胞仪的测定条件,建立分选门,具体操作步骤见 Cellquest操作步骤说明。根据目标细胞的含量,调整流速和样品浓度,使目标细胞通过样品室的浓度为100-300个/秒,最好在200左右。 2、进入CellQuest,从Aquire菜单连机。 3、打开CellQuest中存储的获取窗口,打开优化后存储的仪器设置条件。 4、...
流式分选基本步骤 以某分选型流式细胞仪为例,简要介绍流式分选的基本步骤,不同型号仪器的操作方怯可能有所差异,实际操作时需相应调整。 一般操作步骤: (1)将样品制备成单细胞悬破,尽量减少死细胞、细胞碎片和小颗粒性物质的比例。 (2)荧光素偶联抗体标记样品细...
1、分选前应先做预实验,优化流式细胞仪的测定条件,建立分选门,具体操作步骤见Cellquest操作步骤说明。根据目标细胞的含量,调整流速和样品浓度,使目标细胞通过样品室的浓度为100-300个/秒,最好在200左右。 2、进入CellQuest,从Aquire菜单连机。 3、打开CellQuest中存储的获取窗口,打开优化后存储的仪器设置条件。 4、...
1、分选前应先做预实验,优化流式细胞仪的测定条件,建立分选门,具体操作步骤见Cellquest操作步骤说明。根据目标细胞的含量,调整流速和样品浓度,使目标细胞通过样品室的浓度为100-300个/秒,最好在200左右。 2、进入CellQuest,从Aquire菜单连机。 3、打开CellQuest中存储的获取窗口,打开优化后存储的仪器设置条件。 4、...
1、分选前应先做预实验,优化流式细胞仪的测定条件,建立分选门,具体操作步骤见Cellquest操作步骤说明。根据目标细胞的含量,调整流速和样品浓度,使目标细胞 通过样品室的浓度为100-300个/秒,最好在200左右。 2、进入CellQuest,从Aquire菜单连机。 3、打开CellQuest中存储的获取窗口,打开优化后存储的仪器设置条件。 4、...
巨噬细胞流式分选操作步骤 1.细胞制备:从组织或培养物中分离出巨噬细胞,并进行纯化和计数。 2.标本制备:将细胞悬浮液制备成单细胞悬液,加入细胞染色剂进行标记。 3.流式细胞术:将标记的细胞悬浮液在流式细胞术仪中进行流式分析,选择出要分选的细胞群体。 4.细胞分选:将选择的细胞群体通过流式分选技术进行分选...