PCR产物加上样缓冲液后上样,300～400μl/孔,电压150V,温度60℃,时间2～4小时。 4.平行变性梯度凝胶电泳 变性梯度递增的方向与电泳方向平行。根据垂直变性梯度凝胶电泳检测的解链区域的变性浓度,制备相应变性浓度的平行变性梯度凝胶,检测各标本是否存在突变。 PCR产物加上样缓冲液后,25μl～30μl/孔,电压150V,...
变性梯度凝胶电泳(DGGE)能把长度相同而核苷酸顺序不同的双链DNA片段分开。这种方法利用了DNA分子从双螺旋...
1.一种变性梯度凝胶电泳技术的使用方法,其特征在于,包括以下步骤: (1)藻细胞搜集 (2)总DNA的提取 (3)PCR引物设计及优化 (4)琼脂糖电泳检测 (5)变性梯度凝胶的制备 (6)电泳条件的优化 (7)运用变性梯度凝胶电泳技术对微藻进行分析。 2.根据权利要求1所述变性梯度凝胶电泳技术的使用方法,其特征在于,所述步骤(...
变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术是目前研究微生物群落结构的主要分子生物学方法之一,对其胶的染色主要采用溴化乙锭(EB)或SYBR Green I核酸染料,而由于EB具有高致癌性,所以采用SYBR Green I核酸染料安全性较高。当采用SYBR Green I核酸染料电泳检测DNA时可进行预染(预染方法主要为点染法或胶染法),也可电泳后再进行染色。...
DNA指纹技术的变性梯度凝胶电泳法(DenaturingGradientGelEletrophoresis,DGGE)能有效 分析复杂微生物群落及其多样性且无须培养微生物,而越来越受到重视。DGGE基本原 理是长度相同而碱基组成不同的DNA序列在不同变性条件(如尿素浓度)下变性,在变性 梯度凝胶上特定位置形成泳带。该技术自从1993年被Muyzer等首次用于分析土壤...
目的 探讨应用逆转录-PCR-变性梯度凝胶电泳法(RT-PCR-DGGE)对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因缺陷女性携带者人群进行分子诊断的可行 性.方法 对54例G6PD基因缺陷可疑携带女性的血液标本,应用外周血提取总RNA并逆转录成cDNA;针对已报道的中国人群17种突变位点,以cDNA为模版, 分段设计6对DGGE引物,PCR扩增,DGGE筛查分...
本发明提供一种电泳凝胶制备方法及电泳梯度胶制备方法。电泳凝胶制备方法包括叠板步骤、加胶步骤、加平衡液步骤、离心步骤和凝固包装步骤。采用平衡液浸入胶板结合缝隙,以液体压力抵御离心力,能有效减少离心所带来的漏胶,确保离心分层稳定进行。多种浓度的胶液能依次或同时灌入,通过离心自动分层,不必分层凝固,可连续生产...
1. 如灌制均一浓度凝胶一样在多板凝胶灌制装置中组装好微型胶夹层。 2. 如图一、安装好30 ml 梯度发生器、磁力搅拌器、蠕动泵(可选用)和聚乙烯Tygon管,梯度发生器的输出端连接于制胶室下方的输入口。 图一 3. 配制丙烯酰胺轻溶液和重溶液,省略脱气步骤,在使用前才加入过硫酸铵,如制作5片0.75 mm 厚的...
梯度凝胶电泳法 1. LDL can be divided into several subfractions by density gradient ultracentrifugation andgradient gel electrophoresisaccording to its heterogeneity. 根据低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)颗粒的不均一性,可以利用密度梯度超速离心法和梯度凝胶电泳法将其分成若干亚组分。
摘要:目的 探讨应用逆转录-PCR-变性梯度凝胶电泳法(RT-PCR-DGGE)对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因缺陷女性携带者人群进行分子诊断的可行性.方法 对54例G6PD基因缺陷可疑携带女性的血液标本,应用外周血提取总RNA并逆转录成cDNA;针对已报道的中国人群17种突变位点,以cDNA为模版,分段设计6对DGGE引物,PCR扩增、DGGE筛查...