PCR产物加上样缓冲液后上样,300～400μl/孔,电压150V,温度60℃,时间2～4小时。 4.平行变性梯度凝胶电泳 变性梯度递增的方向与电泳方向平行。根据垂直变性梯度凝胶电泳检测的解链区域的变性浓度,制备相应变性浓度的平行变性梯度凝胶,检测各标本是否存在突变。 PCR产物加上样缓冲液后,25μl～30μl/孔,电压150V,...
变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术是目前研究微生物群落结构的主要分子生物学方法之一,对其胶的染色主要采用溴化乙锭(EB)或SYBR Green I核酸染料,而由于EB具有高致癌性,所以采用SYBR Green I核酸染料安全性较高。当采用SYBR Green I核酸染料电泳检测DNA时可进行预染(预染方法主要为点染法或胶染法),也可电泳后再进行染色。...
1.变性梯度凝胶电泳条带直接测序的系统优化方法,其特征在于包括以下步骤: 1)建立对照图谱:先将每张DGGE图谱的条带最多、最具代表性的样品集中重做1次DGGE,建立对照图谱,其中的条带可以作为不同图谱之间的对照条带,便于确定不同图谱间可能相同的条带; 2)二次DGGE:将一次DGGE条带浸出液的PCR产物重新进行二次DGGE,...
近年来,基于16SrRNA的分子生物学技术促进了微生态研究的发展,特别是被称为DNA指纹技术的变性梯度凝胶电泳法(DenaturingGradientGelEletrophoresis,DGGE)能有效分析复杂微生物群落及其多样性且无须培养微生物,而越来越受到重视。DGGE基本原理是长度相同而碱基组成不同的DNA序列在不同变性条件(如尿素浓度)下变性,在变性梯度...
摘要 变性梯度凝胶电泳条带直接测序的系统优化方法,涉及一种凝胶电泳条带。提供一种DGGE条带直接测序的系统优化方法。建立对照图谱;二次DGGE;多个样品混合上样;减小变性剂浓度梯度;确定相同条带;使用标识样;错开紧邻的条带;再次DGGE。其优点是纯化条带,改善条带PCR回收产物的测序效果;减少相同条带的测序费用。新闻...
变性梯度凝胶电泳Marker的制备方法专利信息由爱企查专利频道提供,变性梯度凝胶电泳Marker的制备方法说明:DGGE电泳Marker的制备方法,涉及一种微生物分子生态学常用技术DGGE中分子标记物的制备...专利查询请上爱企查
摘要 本发明公开了一种变性梯度凝胶电泳技术的使用方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)藻细胞搜集,(2)总DNA的提取,(3)PCR引物设计及优化,(4)琼脂糖电泳检测,(5)变性梯度凝胶的制备,(6)电泳条件的优化,(7)运用变性梯度凝胶电泳技术对微藻进行分析。从GenBank中下载常见微藻的18S?rDNA,28S?rDNA及ITS区序列;运用...
变性梯度凝胶电泳技术检测黄酒麦曲中细菌群落结构的方法专利信息由爱企查专利频道提供,变性梯度凝胶电泳技术检测黄酒麦曲中细菌群落结构的方法说明:本发明公开了一种变性梯度凝胶电泳技术检测黄酒麦曲中细菌群落结构的方法,采用氯化苄法提取麦曲样品...专利查询请上爱
1.变性梯度凝胶电泳技术检测黄酒麦曲中细菌群落结构的方法,其特征在于提取麦曲样品基因组DNA后,通过特定引物PCR扩增细菌16S rDNA V3区、DGGE电泳进行条带分离, 条带回收后进行二次PCR及T-克隆,挑选阳性克隆子DGGE条带比对,比对正确后测序并到 GenBank获取微生物的相关信息。 2.权利要求1所述的方法,其特征在于所述...
摘要:目的 探讨应用逆转录-PCR-变性梯度凝胶电泳法(RT-PCR-DGGE)对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因缺陷女性携带者人群进行分子诊断的可行性.方法 对54例G6PD基因缺陷可疑携带女性的血液标本,应用外周血提取总RNA并逆转录成cDNA;针对已报道的中国人群17种突变位点,以cDNA为模版,分段设计6对DGGE引物,PCR扩增、DGGE筛查...