考点预测:标记技术(同位素标记、荧光蛋白的标记、类似物标记、性状标记、产物标记、透明圈、示踪剂等可作为鉴定指标的都可以做标记) 教材《分子与细胞》【P51同位素标记法】 1、同位素:在同一元素中,质子数相同、中子数不同的原子为同位素,如160与18...
光催化邻近标记测序(Chromophore-assisted proximity labeling and sequencing,CAP-seq)是基于邻近标记技术原理基础上改进的,在蓝光激发下光敏蛋白miniSOG产生的单线态氧迅速对邻近RNA分子上鸟嘌呤的造成氧化损伤,同时将一个带有生物正交官能团的氨基探针共价交联到RNA损伤的碱基上,既而通过富集纯化与高通量测序检测RNA,由于单...
APEX2邻近标记技术的工作原理是将诱饵蛋白与APEX2过氧化物酶融合表达，在H2O2的作用下，APEX2过氧化物酶可催化BP生成生物素偶联的苯氧自由基，产生的生物素-苯氧自由基是短暂的（半衰期<1ms），并且可以共价结合到相邻蛋白质侧链上电子密度较高的氨基酸，如酪氨酸（Tyr）、色氨酸（Trp）、组氨酸（His）和半胱氨酸...
2023年4月,上海交通大学科研团队发表了一项新型邻近标记技术,命名为Specific Pupylation as IDEntity Reporter (SPIDER),其原理来自结核分枝杆菌类泛素蛋白酶体系统中底物Pup分子在体外能够招募PafA连接酶发挥邻近标记作用。该技术可应用于蛋白-蛋白、蛋白-核酸、蛋白-...
Zenon标记技术为制备荧光标记抗体提供了一种快速、通用且可靠的实验方法,此标记方法可利用各种荧光染料,并且起始原料可以为极少量、未纯化 (如杂交瘤细胞的培养上清液) 的抗体。 利用Zenon标记技术标记的抗体适用于所有可使用直标抗体的应用领域。 Zenon 标记技术的优势包括: 10 分钟贴记时间 每个标记1– 20 微...
邻近标记(proximity labeling, PL)技术的基本原理是将一个具有连接酶活性的酶(目前植物中广泛应用的为TurboID)与目的蛋白融合, 在连接酶的催化作用下将小分子底物(如生物素(biotin))连接到与目的蛋白邻近的内源蛋白或RNA, 而后可通过富集被标记的蛋白或RNA分别进行质谱分析或RNA-Seq, 可鉴定目的蛋白邻近的蛋白或RNA...
邻近标记技术的发展史 随着转录组的出现和大量候选基因的发展，识别关键的蛋白质相互作用因子成为推进科学技术发展严重瓶颈。为了阐明大分子复合物的成分，可以进行生化分级分离和质谱分析以及使用蛋白质的亲和纯化（通常通过抗体），然后进行质谱分析，然而，这些方法均存在一定的局限性。01BioID、BioID2和Split-BioID 201...
荧光标记技术是一种在生物医学和分子生物学领域中广泛应用的可视化技术，它通过将荧光染料（荧光基团或荧光素）选择性地共价结合或物理吸附在所要研究分子（如蛋白质、多肽等）的某个基团上，利用其荧光特性来提供被研究对象的信息。这种方法不仅可以用于神经纤维的逆行标记，还可以用于蛋白质、多肽等分子的研究，以及在...
文章采用基于TurboID的邻近标记技术筛选并验证了与FOXO1相互作用的蛋白。TurboID作为一种生物素连接酶，具有比BioID或APEX更高的催化效率，可将所需的标记时间从18h减少到10min。由于许多蛋白质参与的结合和催化事件都是非常短暂的，因此理论上可以使用TurboID技术找到相对较新的结合蛋白。研究背景 近年来，随着生活质量...