表 常见蛋白互作技术对比 一、APEX2邻近标记技术 APEX2（Ascorbate Peroxidase 2），中文名为抗坏血酸过氧化物酶，是基于豌豆（Pea）源或大豆（Soybean）源的抗坏血酸酶经工程改造而来。2012年，美国科学家Alice Ting实验室通过位点突变的方法改造野生型抗坏血酸过氧化物酶（Ascorbate Peroxidase，APX），筛选获得了...
介于免疫共沉淀（Co-IP）因为不能有效地捕获瞬时或较弱的蛋白相互作用而存在一定的限制，科学家们开发出了一种新的研究相互作用的蛋白质组学技术——邻近标记技术（Proximity labeling，PL），它不仅无需构建文库或使用抗体，还对疏水性和低丰度蛋白的互作蛋白鉴定以及弱/瞬时互作蛋白的分析具有独特的优势。邻近标记可...
除了对细胞内特定区域的蛋白质进行标记，作者还将APEX2-SOPP3介导的邻近标记反应拓展至细胞与细胞之间的交界面，发现该系统不仅实现了亚细胞器间的邻近标记，而且实现了细胞间的邻近标记。为了进一步拓展该标记技术的应用场景，作者将APEX2与SOPP3进行了融合表达，并将该融合蛋白表达于多种亚细胞区域，发现其均能在5-1...
Letters（IF：31.6）上发表了题为“Molecular Mechanisms of Intracellular Delivery of Nanoparticles Monitored by an Enzyme-Induced Proximity Labeling”的研究性论文，由于缺乏技术手段来实时检测纳米药物在细胞内递送过程中的相互作用蛋白，研究团队开发了一种酶诱导的邻近标记技术（nano-EPL），用于实时监测与细胞内...
这种强相互作用能够轻松地将带有生物素标记的蛋白质纯化出来并进行鉴定。图1 常用PL酶的标记原理示意图（Mathew et al., 2022）。邻近标记技术的发展史 随着转录组的出现和大量候选基因的发展，识别关键的蛋白质相互作用因子成为推进科学技术发展严重瓶颈。为了阐明大分子复合物的成分，可以进行生化分级分离和质谱分析...
邻近标记(Proximity Labeling,PL)技术是一种利用蛋白质分子间的空间接近关系以大规模精确鉴定未知蛋白质-蛋白质相互作用及其动态变化信息的生物学工具,对于生物学功能的探索和疾病发生机制的理解具有重要的意义。目前以APEX2为代表的过氧化物...
由于苯氧自由基的半衰期很短,又不能透过生物膜,所以APEX邻近标记技术对于研究具有膜封闭结构的细胞器蛋白质组具有独特的优势。 二、APEX2邻近标记技术的原理 APEX2邻近标记技术的工作原理是将诱饵蛋白与APEX2过氧化物酶融合表达,在H2O2的作用下,APEX2过氧化物酶可催化BP生成生物素偶联的苯氧自由基,产生的生物素-苯...
原有的邻近标记技术虽然广泛应用于鉴定特定细胞区域内的组成蛋白，但局限于单个时间点的静态信息。基于 Alice Ting 实验室已有的基础，秦为开发了一种能够解析活细胞内蛋白质时空动态过程的邻近标记技术，为精确理解蛋白质功能的动态调控奠定了基础。2023 年，这项研究成果正式发表于 Cell 期刊，也是他首次以一作身份在...
介于免疫共沉淀(Co-IP)因为不能有效地捕获瞬时或较弱的蛋白相互作用而存在一定的限制,科学家们开发出了一种新的研究相互作用的蛋白质组学技术——邻近标记技术(Proximity labeling,PL),它不仅无需构建文库或使用抗体,还对疏水性和低丰度蛋白的互作蛋白鉴定以及弱/瞬时互作蛋白的分析具有独特的优势。