简述染色质免疫共沉淀(ChIP)技术原理与基本过程。 答案 (1)基本原理:在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得能真实、完整地反映蛋白质与DNA相互作用的信息。(2)...
作为一种研究蛋白质与DNA相互作用的技术,ChIP可以完整真实地反映细胞中特定蛋白与DNA的结合关系,它通过多种蛋白质组学和分子生物学方法,包括交联、细胞裂解(蛋白质-DNA提取)、核酸剪切、抗体免疫沉淀、DNA样本回收,将蛋白-DNA复合物分离出来进一步研究特定的结合蛋白或与其结合的DNA,同时结合qPCR(ChIP-qPCR)可用于检测...
CHIP技术即染色质免疫共沉淀,用来研究___内___与___相互作用与确定基因组上与___修饰相关的特定位点。其原理是:___里的蛋白和相关染色质暂时结合后染色质(DNA)-蛋白复合物被剪切,与所研究蛋白相关的DNA片断被选择性免疫沉淀;相关DNA片断被纯化,顺序被测定。相关知识点: 试题来源: 解析 细胞DNA 蛋白...
答:(1)染色质免疫共沉淀技术的原理 在生理状态下固定细胞内的蛋白质-DNA复合物,通过超声或酶处理将染色质随机切断为一定长度范围内的小片段,利用抗原抗体的特异性识别反应沉淀复合物,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片断的纯化与检测,获得该蛋白质与DNA相互作用的信息。 (2)染色质免疫共沉淀技术的基...
染色质免疫共沉淀技术，简称ChIP，是一种研究体内蛋白质与DNA相互作用的强大工具。通过这种技术，科学家们能够深入探索基因调控的奥秘，揭示蛋白质如何影响DNA的转录和表达。染色质免疫共沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，简称ChIP），其核心原理是利用抗原抗体反应的特异性，实现对DNA结合蛋白及其DNA靶标的选择性富集...
4. 在100 ul的超声破碎产物中,加入900 ul ChIP DilutionBuffer和20 ul的50xPIC。 再各加入60 ul ProteinA Agarose/SalmonSpermDNA。4℃颠转混匀1 h。 5. 1 h后,在4℃静置10 min沉淀,700 rpm离心1 min。 6. 取上清。各留取20 ul做为input。一管中加入1 ul抗体,另一管中则不加抗体。4℃颠转过夜...
ChIP技术的原理 在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来,以富集存在组蛋白修饰或者转录调控的DNA片段,再通过多种下游检测技术(定量PCR、基因芯片、测序等)来检测此富集片段的DNA序列。(检测相关技术服...
染色质免疫共沉淀技术原理 一、前言 染色质免疫共沉淀技术(ChIP)是生物学研究中常用的一种方法,它通过利用抗体特异性识别染色质上的特定蛋白质,进而从复杂的细胞核提取物中富集这些蛋白质,并对其进行鉴定和分析。本文将详细介绍染色质免疫共沉淀技术的原理。 二、实验步骤 1. 交联 首先,需要对活细胞进行交联处理,以...
一、ChIP实验的原理 ChIP实验的基本原理是在活细胞状态下,通过交联剂(如甲醛)固定细胞内蛋白质与DNA之间的相互作用,然后将染色质随机打断成一定长度范围内的片段。接着,利用特异性抗体与目标蛋白-DNA复合物的结合,通过免疫沉淀法富集目标蛋白结合的DNA片段。最后,通过DNA纯化及定量聚合酶链反应(qPCR)等方法,分析目标DN...