拟南芥 T-DNA 插入突变纯合体的鉴定 余振洋(高山山、 潘红芳)、 09 级生技 1 班、 200900140156、 2011/12/14 摘要 本实验通过 CTAB 法提取目 的拟南芥的 DNA, 再用三引物法 PCR 扩增所需的目 的基因后, 用电泳检测该拟南芥是否为转基因的拟南芥, 并判断其是纯合突变还是杂合突变。 关键词 拟南芥; T-...
PCR方法为鉴定纯合突变体提供了有利手段。它利用三个引物LP、RP和BP,其中LP和RP是植物基因组上T-DNA插入位点两测的引物,BP是T-DNA区段上的引物。 经过PCR,在野生型植株,LP和RP这对引物扩增出分子量较大的产物(野生型基因,大带);在杂合突变体,LP和RP能扩增出分子量较大的产物(野生型基因,大带),另外BP和RP...
拟南芥SYTA基因T-DNA插入纯合突变体的鉴定及表型分析 热度: 相关推荐 拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定 09生工吴超200900140129 一、实验原理 T-DNA插入法是反向遗传学研究的重要手段。T-DNA是农杆菌的一个大质 粒,长度在25kb左右。野生型农杆菌的T-DNA上带有激素合成基因,感染植物 后会导致植物细胞快速增殖形成愈伤组...
型的植株。此法的有点事可同时鉴定出纯合突变体并确证T-DNA的插入情况。 “双引物法”的基本原理与“三引物法”相似,即采用特异引物扩增目的基因片段和 T-DNA插入片段,通过比对扩增结果进行突变体的鉴定。具体方法图2所示:首先以基因组 DNA为模版,用一对特意产物(LP和RP)扩增目的基因片段,初步鉴定出纯合突变体(...
T-DNA插入突变体鉴定方法主要有两种：三引物法和双引物法。在本实验中使用三引物法。三引物法的原理如图1所示，即采用三引物（LP、RP、BP）进行PCR扩增。野生型植株目的基因的两条染色体上均未发生T-DNA插入，所以其PCR产物仅有1种，分子量约900bp（即从LP到RP）；纯合突变体植株目的基因的两条染色体上均发生T...
所以利用农杆菌Ti质粒转化植物 细胞,是获得植物突变体的一种重要方法。 2021/10/10 3 3. 用PCR方法鉴定T-DNA插入纯合突变体 ▪ 农杆菌Ti质粒转化植物细胞后,在获得的后代分离群体中, 有T-DNA插入的纯合突变体,杂合突变体,和野生型。在 突变体研究中,需要的材料是纯合突变体,所以必须从分 离群体中将纯合...
本实验以拟南芥植株的特定基因突变体作为实验材料,提取 DNA ,并通过 R PCR 扩增及 SDS- -E PAGE 电泳分离检测鉴定,检测该拟南芥是否为转基因的拟南芥,并判断其是纯合突变还是杂合突变。本次实验目的在于了解拟南芥T T- -A DNA 插入突变体鉴定的原理,掌握 A DNA 提取技术、R PCR 技术以 及电泳鉴定技术,对...
[目的]了解拟南芥T-DNA插入突变体鉴定的基本原理,掌握提取植物基因组DNA的方 法,PCR,以及用琼脂糖凝胶分离核酸的方法。[方法]首先提取拟南芥基因组DNA,PCR 扩增目的片段,最后分析电泳结果筛选出纯合突变体。[结果与结论]由电泳结果可观察到在 1000-1500bp间和800-900bp间分别有条带,说明此拟南芥为杂合突变体植株。
拟南芥是严格的闭花自花受粉植物,基因高度纯合。易获通过理化处理 获得各种功能的突变体。模式植物拟南芥生长周期形态结构模式植物拟南芥突变体的获得插入突变(insertionalmutagenesis),即将外源DNA随机插入到拟南芥基因组中而获得其突变体。植物中最常见的插入突变方法是T-DNA插入突变。农杆菌转化法:Ti质粒是土壤农杆菌的...