彗星实验是一种用于测量DNA损伤的实验方法,其量化步骤如下: 1.细胞处理:将待测细胞进行处理,例如加入化学物质或辐射等,以诱导DNA损伤。 2.细胞裂解:将处理后的细胞进行裂解,使细胞内的DNA暴露出来。 3.电泳:将裂解后的细胞进行电泳分离,一般采用琼脂糖凝胶电泳,将DNA片段按大小分离。 4.染色:将电泳后的DNA染色...
彗星实验可以帮助我们更好地理解彗星的形成和性质。以下是彗星实验的步骤: 材料: -一块冰块 -一盆水 -一小束干冰 -一台射灯或强力手电筒 -一个黑暗的室内或夜晚的户外空间 步骤1:准备冰块和水 在一盆水中放入一块冰块,确保冰块完全浸泡在水中。这样可以模拟太阳系中的彗核。 步骤2:制作彗尾 将一小束干冰...
通过将Singh和Gichner等人建立的碱性彗星实验方案应用于水稻（Oryza sativa L.）来确定原发性DNA损伤。所有的实验步骤都是在冰床上避光进行的。1、对于每一盆水稻，取鲜叶0.1 g，用刀片切碎，加入2个100 μL装有三羟甲基氨基甲烷盐酸提取缓冲液（Tris-HCl提取液，0.1 M，pH=7.5，4℃保存）的离心管中；2...
(2) 细胞裂解 移去盖玻片,将载玻片浸入新配置的细胞裂解液中至少裂解1h(在放第一片开始计时,再以同样的顺序取出,确保每张片子裂解时间相同)。此步骤的目的是溶解细胞膜及核膜,除去蛋白质、RNA等,仅存留核骨架。 (3) DNA碱解旋 细胞裂解后,取出载玻片,用PBS冲洗2次,以去掉载玻片表面高浓度的盐,然后将载玻片置...
彗星实验第一步:分离制备单细胞悬液: (1)体外培养的细胞株:用胰酶消化,最后用PBS悬浮吹打成单细胞悬液,细胞要计数,具体的量我前边已经说过。 (2)体内脏器细胞:处死动物,取出脏器,于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。 彗星实验第二步:胶板制备: (1)取100μl于45℃水浴中保温的0.5%NMA,铺于磨沙载玻片上,形...
彗星实验(Comet assay)也被称为单细胞凝胶电泳实验(Single cell gel electrophoresis,SCGE),是一种超灵敏的单细胞水平上检测DNA损伤的技术,可以检测到1.657×10-15中0.1个DNA的断裂,甚至检出自然光照射体外淋巴细胞1h后引起的DNA损伤。在电泳场下,损伤的细胞DNA(包含碎片和链断裂)从完整的DNA中分离出来,在显微镜下形...
染色后的DNA样品应尽快在荧光显微镜下进行观察。未受损的细胞表现为圆形荧光核心（即彗星头部），没有尾巴。受损的细胞则呈现出彗尾朝向阳极的形态，形成明亮的头部和尾部。经验分享 实验环境：除了中和和染色步骤外，其他步骤都要在暗处进行，以避免额外的DNA损伤。玻片处理：在制备凝胶时，必须防止脱胶现象的发生。脱胶...
彗星实验操作步骤(DNA损伤检测),彗星实验操作步骤 Chapter 6 The Comet Assay: A Sensitive Genotoxicity Test for the Detection of DNA Damage and Repair Günter Speit and Andreas Rothfuss Abstract The comet assay (single-cell gel electrophoresis) is a simple and sensitive method for studying DNA damage...
1、 小鼠肝细胞彗星实验试剂配制及步骤 1%正常熔点琼脂糖NMA: 10mL 0.1g NMA (PBS配制) 微波炉加热 0.7%低熔点琼脂糖 LMA: 10mL 0.07g LMA (PBS配制) 水浴锅37保温 细胞裂解液(4) :(2.5mM)NaCl +(100mM)Na2EDTA +(10mM)Tris 调pH=10 1000mL: 146.1g NaCl 37.22g Na2EDTA 1.22g Tris 500mL: 73.05...
水稻植株彗星实验步骤 通过将Singh和Gichner等人建立的碱性彗星实验方案应用于水稻(Oryza sativa L.)来确定原发性DNA损伤。所有的实验步骤都是在冰床上避光进行的。 1、对于每一盆水稻,取鲜叶0.1 g,用刀片切碎,加入2个100 μL装有三羟甲基氨基甲烷盐酸提取缓冲液(Tris-HCl提取液,0.1 M,pH=7.5,4℃保存)的离...