(1)随机引物适用于长的或具有发卡结构的RNA,例如rRNA、mRNA、tRNA等,主要用于单一模板的 RT-PCR反应 (2) oligo(dT)适用于具有poly(A)尾巴的RNA[原核生物的RNA、真核生物的rRNA和tRNA不具有poly(A)尾巴]。由于 oligo(dT)要结合poly(A)尾巴上,所以对RNA样品的质量要求较高,即使有少量降解也会使全长cDNA合成...
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取反应，多出的两个中一个是 PC（样 品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 试剂 盒提供的 RT-PCR 阳性对照（1×10E4 拷贝/μL）再加上一定量的水作为制 备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试 剂盒...
选取新型冠状病毒 ORF和N基因,以及甲、乙型流感病毒M基因的核苷酸保守区域,设计和筛选出多重巢式荧光PCR引物和探针组合,同时引入人源基因内标的巢式扩增引物和探针,建立一套多重巢式荧光RT-PCR检测方法,应用制备的假病毒阳性质控品和样本...
主要用于单一模板的RT-PCR反应。 oligo(dT):适用于具有poly(A)尾巴的RNA(原核生物的RNA、真核生物的rRNA和tRNA不具有poly(A)尾巴)。由于oligo(dT)要结合poly(A)尾巴上,所以对RNA样品的质量要求较高,即使有少量降解也会使全长cDNA合成量大大减少。 基因特异性引物:与模板序列互补的引物,适用于目的序列已知的情...
巢式PCR:利用两套PCR引物对进行两轮PCR扩增反应组成,在第一轮扩增中,外引物用以产生扩增产物,此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增 巢式RT- PCR,这种方法的特点是需要设计两对引物,一对引物扩增稍长片段,在这一扩增范围内再设计一对引物,扩增的产物是以第一对引物的产物为模版 RT-PCR是以mRNA为模板,经逆...
即nested PCR，是指利用两套PCR引物（巢式引物）对进行两轮PCR扩增反应。 在第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。 由于巢式PCR反应有两次PCR扩增，从而降低了扩增多个靶位点的可能性（因为与两套引物都互补的引物很少）增加了检测的敏感性；又有两对...
活性蛋白整体方案 Active Protein Solutions 反转录巢式 pcr 反转录巢式 PCR( RT-nested PCR)是在反转录 PCR 的基础上发展起来的,在通过反转录获得 cDNA 的基础上,对 目的基因进行巢式 PCR 扩增.它和简单的反转录 PCR 一样是用于检测某种 RNA 是否被表达或者比较其相对表达 水平,但是特异性更高,可靠性更强,...
[ 摘要]目的探讨巢式R T—PCR 检测肺组织中E —cadmRNA 相对含量的最适实验条件. 方法通过改变巢式R T—PCR 反应体系各组分的浓度和反应条件, 探讨巢式R T—PCR 反应体系最适浓度和反应条件. 结果巢式R T—PCR 反应体系为d NTP200卜m oi/L,MgCl21.5mmol/L, 引物600nmol/L,TaqDNA 聚合酶0 .1U/p....
狂犬病病毒 RT-PCR 试剂盒的特点：狂犬病病毒（Rabies virus, RV）属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病病毒 属(Lyssavirus)。外形呈弹状，核衣壳呈螺旋对称，表面具有包膜，内含有单链 RNA。是引起狂犬病的病原体。狂犬病（Rabies）作为一种由狂犬病病毒所致的人畜共患急性传染病，多见于犬、狼、猫等肉食动物，...
此外,mOTNRT-PCR可以于2.7小时内在5管中同时检测出14种常见的呼吸道病毒,一个样品的成本仅为7.5美元(不包括核酸提取)。综上所述,利用LNA开发的mOTNRT-PCR测定法是一种可以同时检测14种呼吸道病毒的新型方法,具有灵敏度高、操作简便和经济等优势,在呼吸道病毒感染的常规监测运用中有很大的潜力。(苏州大学附属第三...