本发明涉及基因工程领域,目的在于提供一种巢式一步法RT-PCR从单个B细胞扩增鼠源抗体重链和轻链可变区基因全序列的方法.本发明根据NCBI和VBASE的小鼠免疫球蛋白重链和轻链的V基因序列设计兼并引物,可以特异性地扩增得到囊括所有V基因种类的DNA序列.然后通过特定的接头DNA片段(Linker接头)将重链和轻链的可变区基因序列...
然后通过特定的接头DNA片段(Linker接头)将重链和轻链的可变区基因序列连接在一起,再通过巢式PCR进行扩增,并带入酶切位点,可以克隆到特定的双向表达载体,进行真核表达。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是: 一种巢式一步法RT-PCR从单个B细胞扩增鼠源抗体重链和轻链可变区基因全序列的方法,所述的方法步骤如下...
本发明涉及基因工程领域,目的在于提供一种巢式一步法RT-PCR从单个B细胞扩增鼠源抗体重链和轻链可变区基因全序列的方法.本发明根据NCBI和VBASE的小鼠免疫球蛋白重链和轻链的V基因序列设计兼并引物,可以特异性地扩增得到囊括所有V基因种类的DNA序列.然后通过特定的接头DNA片段(Linker接头)将重链和轻链的可变区基因序列...