活性蛋白整体方案 Active Protein Solutions 反转录巢式 pcr 反转录巢式 PCR( RT-nested PCR)是在反转录 PCR 的基础上发展起来的,在通过反转录获得 cDNA 的基础上,对 目的基因进行巢式 PCR 扩增.它和简单的反转录 PCR 一样是用于检测某种 RNA 是否被表达或者比较其相对表达 水平,但是特异性更高,
(1)随机引物适用于长的或具有发卡结构的RNA,例如rRNA、mRNA、tRNA等,主要用于单一模板的 RT-PCR反应 (2) oligo(dT)适用于具有poly(A)尾巴的RNA[原核生物的RNA、真核生物的rRNA和tRNA不具有poly(A)尾巴]。由于 oligo(dT)要结合poly(A)尾巴上,所以对RNA样品的质量要求较高,即使有少量降解也会使全长cDNA合成...
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取反应，多出的两个中一个是 PC（样 品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 试剂 盒提供的 RT-PCR 阳性对照（1×10E4 拷贝/μL）再加上一定量的水作为制 备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试 剂盒...
巢式PCR：利用两套PCR引物对进行两轮PCR扩增反应组成，在第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增 巢式RT- PCR,这种方法的特点是需要设计两对引物，一对引物扩增稍长片段，在这一扩增范围内再设计一对引物，扩增的产物是以第一对引物的产物为模版 RT-PCR是以mRNA为模板，...
RT-PCR相较于前者来说就简单得多。其全称为反转录PCR,或逆转录PCR。首先我们要清楚什么是反转录,我们一般将遗传信息从DNA流向RNA的过程称为转录,反之,以RNA为模板合成DNA的过程我们称为反转录。 该技术的一般过程为,首先以RNA为模板在反转录酶的作用下合成其对应cDNA,...
主要用于单一模板的RT-PCR反应。 oligo(dT):适用于具有poly(A)尾巴的RNA(原核生物的RNA、真核生物的rRNA和tRNA不具有poly(A)尾巴)。由于oligo(dT)要结合poly(A)尾巴上,所以对RNA样品的质量要求较高,即使有少量降解也会使全长cDNA合成量大大减少。 基因特异性引物:与模板序列互补的引物,适用于目的序列已知的...
随着生物技术的飞速发展,PCR技术已广泛应用于疾病诊断、分子克隆、基因测序等,PCR类型主要包括实时荧光定量RT -PCR、重叠延伸PCR、大引物PCR、反向PCR、巢式PCR等。1.实时荧光定量RT -PCR技术检测目的基因浓度:与目的基因特异性结合的荧光标记探针完整时,报告基团(R)发射的荧光信号被淬灭基团(Q)吸收,不产生荧光。 在...
狂犬病病毒 RT-PCR 试剂盒的特点：狂犬病病毒（Rabies virus, RV）属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病病毒 属(Lyssavirus)。外形呈弹状，核衣壳呈螺旋对称，表面具有包膜，内含有单链 RNA。是引起狂犬病的病原体。狂犬病（Rabies）作为一种由狂犬病病毒所致的人畜共患急性传染病，多见于犬、狼、猫等肉食动物，...
5. 一步法多重巢式荧光RT-PCR性能评价:(1)假病毒阳性质控品提取的RNA用EASY Dilution进行102~109共8个稀释度的10倍系列稀释,分别进行新型冠状病毒(ORF/N)和甲、乙型流感病毒的一步法单重和多重巢式荧光RT-PCR方法检测,每个浓度均...
猪瘟巢式RT—PCR监测方法的建立