实时定量反转录聚合酶链式反应(Real-Time Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chn Reaction,简称实时定量RT-PCR)是一种在DNA扩增过程中,通过荧光信号实时监测反应产物量的变化,从而得到起始模板量的分析方法。这种技术结合了反转录(RT)和聚合酶链式反应(PCR)两个过程,使得RNA模板也能进行定量分析。 实时定量RT...
实时荧光RT-PCR的原理基于传统的聚合酶链反应(PCR)技术和逆转录(RT)技术,同时引入了荧光探针并利用了荧光信号的强度和需求时间。实时荧光RT-PCR包括三个主要步骤:逆转录、扩增反应和检测。 在逆转录步骤中,首先需要提取目标RNA(信使RNA)并将其转录成互补的DNA分子,这一步骤称为逆转录。逆转录酶会选择性地识别RNA...
(10分)新型冠状病毒的检测方法很多,实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)法是目前核酸检测的主要方法,操作流程:采集样本→提取RNA→逆转录成cDNA→PCR扩增→结果分析。下图是RT-PCR两步法的过程图,在PCR扩增时加入能与目的基因(新冠病毒的核壳蛋白N基因)结合的荧光探针。目的基因合成越多,荧光信号越强,回答下列...
实时荧光定量PCR(RT-qPCR)是一种用于实时扩增和检测特定DNA或RNA序列的分子生物学技术。该方法利用荧光染料或探针,当与扩增的DNA或RNA分子结合时会发出信号,从而可以对目标序列进行量化。RT-qPCR通常用于基因表达
实时荧光RT-PCR技术是将逆转录(RT)、PCR以及荧光标记等相结合的技术,是检测新型冠状病毒核酸序列最常用的方法。其具体的过程为:从样品中提取RNA→cDNA→PCR扩增→荧光检测。回答下列问题:(1)RT-PCR操作过程中,所需的酶有___。PCR过程中温度的控制至关重要,需要依次设置不同的循环温度参数:95℃-30s、55℃-45...
PCR技术与DNA体内复制的复制方式都是半保留复制;RT-PCR过程中cDNA的合成为逆转录过程,需向装置中添加逆转录酶。 (2) 根据图示,RNA提取裂解液含有的蛋白酶K,可以促进病毒蛋白质的水解,起到灭活病毒的作用;采样后迅速进行病毒灭活,可以防止样本在运输和检测阶段造成病毒泄漏,以提高样本转运和检测阶段的安全性;RNA酶能...
本实验将该系列引物和探针引入果蔬中HAstV的检测,通过对10倍梯度稀释的cRNA进行进行实时荧光定量RT-PCR扩增分析,发现该系列引物和探针的扩增效率达95%以上,最低检测限可达5.6拷贝/反应,且检测Ct值同模板拷贝数的对数值存在良好的线性关系,R2达0.997,从而...
目前广泛应用的新型冠状病毒检测方法是实时荧光RT-PCR技术。RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术,具体过程如图所示。下列说法错
A、过程①是由mRNA形成单链DNA的过程,表示逆转录,A正确;B、决定实时荧光RT-PCR扩增片段的是引物;过程②、③拟对单链cDNA进行n次循环的扩增,根据DNA分子半保留复制特点可知,该过程理论上至少需要2n-1个引物B,B错误;C、利用实时荧光RT-PCR技术对某些微量RNA病毒进行检测时可提高检测的灵敏度,是因为增加了待测RNA...