逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。作用 RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极...
实时荧光定量PCR（RT-PCR）自发明以来的 30 多年里，聚合酶链式反应 (PCR) 已成为分子生物学家的主要技术。 其不可或缺的秘诀在于其简单性和多功能性。 该技术的许多变体已经被开发出来； 其中之一，实时PCR，已成为基因表达定量研究、确定临床样本中的病原体载量以及检测 SNP/突变的首选方法。什么是实时 PCR？...
一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...
(3) PCR 扩增：以合成的 cDNA 为模板进行 PCR 或 qPCR 实验。(RT-qPCR 分一步法 RT-qPCR 和两...
常用的数据分析方法有标准曲线法和比较CT值法。 实时定量RTPCR技术在生物学、医学等领域具有广泛的应用前景。例如,实时定量RTPCR可以用于研究基因表达调控,探讨疾病的发生机制以及评估治疗效果等。实时定量RTPCR还可以应用于转录组学研究,为生物医药领域提供更深入的了解和研究。 实时定量RTPCR是一种高灵敏度、高精度的...
实时荧光定量PCR,简称 RT-QPCR, 属于 Q-PCR 的一种,目前该技术已得 到广泛应用,如:扩增特异性分析、基因定量分析、基因分型、SNP 分析等。荧 光定量 PCR 最常用的方法是 DNA 结合染料 SYBR GreenⅠ的非特异性方法和 Taqman 水解探针的特异性方法。
一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...
实时荧光RT-PCR的原理基于传统的聚合酶链反应(PCR)技术和逆转录(RT)技术,同时引入了荧光探针并利用了荧光信号的强度和需求时间。实时荧光RT-PCR包括三个主要步骤:逆转录、扩增反应和检测。 在逆转录步骤中,首先需要提取目标RNA(信使RNA)并将其转录成互补的DNA分子,这一步骤称为逆转录。逆转录酶会选择性地识别RNA...
SYBR Green I染料法通过SYBR Green I染料与PCR过程中产生的双链DNA结合,而对聚合酶链反应(PCR)的产物进行检测。工作原理: 步骤、过程 当SYBR Green I染料被加入到样品中后,它可立即与样品中的双链DNA进行结合 。 在PCR过程中,Applied Biosystems AmpliTaq Gold DNA聚合酶可对目标序列进行扩增,以产生PCR...