实时荧光RT-PCR可用于新型冠状病毒的核酸检测,RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA聚合酶链式扩增反应相结合的技术,其原理是:在PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合,探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团,新链延伸过程中,DNA聚合酶会破坏探针,导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用RT-PCR进行核酸检测...
(2)进行PCR扩增时,需要加入设计好的一对引物。该“试剂盒”中加入的引物是根据新型冠状病毒RNA的序列设计合成的,能够与新型冠状病毒RNA通过碱基互补配对结合,因此只能专一性的扩增新型冠状病毒的核酸序列。 (3)从新冠肺炎康复者的血清中能够分离出相应抗体,这种方法属于传统的方法,具有产量低、纯度低、特异性差的缺点...
新型冠状病毒的检测方法很多,实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)是目前核酸检测的主要方法,操作流程:采集样本→提取RNA→逆转录成cDNA→PCR扩增→结果分析。
新型冠状病毒的检测主要包含核酸检测、抗体检测、抗原检测等几种方法。其中利用实时荧光RT-PCR技术检测新型冠状病毒特异性核酸序列是最常用的方法。RT-PCR是将逆转录(R
1 下图为采用“实时荧光定量RT-PCR”技术检测新型冠状病毒核酸的基本流程,1~2h内即可得到检测结果。其基本原理是在DNA的复制过程中加入与特定模板链互补的荧光探针,这样每新合成一条DNA单链,就会产生一个荧光分子,通过检测荧光信号即可确定是否为阳性。下列相关说法正确的是( )A.①、②过程需要分别加入四种核糖核苷酸...
(2)RT-PCR是先将新型冠状病毒的RNA逆转录成cDNA,然后再进行PCR(体外DNA复制),探针能与N基因序列特异性结合,由于DNA的结构为反向平行的两条链,5′与3′互补配对,因此与探针结合的序列应该是5′-AATCT……AGCAA-3′;PCR扩增时荧光探针被Taq酶切降解,使报告荧光基因和淬灭荧光基因基团分离,即每扩增一个DNA分子...
23.(13分)新型冠状病毒的检测主要包含核酸检测、抗体检测、抗原检测等几种方法。其中利用实时荧光RT-PCR技术检测新型冠状病毒特异性核酸序列是最常用的方法。RT-PCR是将逆转录(RT)、PCR以及荧光标记等相结合的技术。下图1为数字PCR技术的原理示意图。荧光的出现是荧光探针水解导致的,荧光探针将首先与模板DNA的相应区...
实时荧光RT-PCR技术是将逆转录(RT)、PCR以及荧光标记等相结合的技术,是检测新型冠状病毒核酸序列最常用的方法。其具体的过程为:从样品中提取RNA→cDNA→PCR扩增→荧光检测。回答下列问题:(1)RT-PCR操作过程中,所需的酶有___。PCR过程中温度的控制至关重要,需要依次设置不同的循环温度参数:95℃-30s、55℃-45...
核酸检测在诊断新型冠状病毒感染中发挥着关键作用,其中一种比较常用的技术是实时荧光RT-PCR(逆转录PCR),其检测试剂盒包含逆转录酶试剂、引物、缓冲试剂等。抗体疗法是针对新冠肺炎的临床试验疗法之一。请回答下列问题: (1)核酸检测样本多采集于咽、鼻,这些部位存在多种微生物,提取物中核酸种类可能有多种。但利用该“...
(3)若送检样木中存在新型冠状病毒,则以病毒RNA为模板,在逆转录酶的作用下合成cDNA。反应体系中加入的dATP、dTTP、dCTP、dGTP,能够水解产生四种游离的脱氧核苷酸,同时释放出能量,为反应提供原料和能量。再在PCR扩增仪中加入互补的荧光探针、2种引物和Taq酶后,开始扩增cDNA,当子链延伸至探针处,会水解探针释放出荧光...