探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。 三. RT-qPCR具体实验步骤 引物设计: 除了遵循一...
💻 上机操作:将配置好的反应液放入实时qPCR仪中,设置相应的温度循环和采集模式,进行扩增检测。real-time qPCR不需要常规PCR的三步法(变性、退火、延伸)。 由于产物长度短(80-150 bp),通常只需要变性和退火步骤。 使用SYBR Green等染料时,PCR后应加溶解程序以形成溶解曲线,判断特异性扩增。 📊 数据分析:通过扩...
PCR酶：可按需要选择普通的Taq酶、可扩增长片段的Taq酶或高保真酶。PCR体系：按所选的PCR酶说明书来配...
生物学小白不容错过~实时荧光定量PCR(Q-PCR)实验全流程(三)8连排上机操作! 1.2万 6 9:10 App PCR仪使用教学 4.5万 2 6:02 App RT-qPCR实验流程 1.7万 2 7:21 App 【荧光定量QPCR】伯乐仪器qpcr上机操作 1.8万 3 3:36 App 三分钟读懂数字PCR 1.9万 1 1:07 App PCR、RT-PCR、qRT-PCR终于...
Q-PCR 扩增 三、实验步骤 反转录反应 配置Template primer mix RNA 变性及反转录 2.Q-PCR 扩增 配置PCR 反应体系 设置并运行 PCR 程序 3.程序设定 在LightCycler® 480 软件中设置反应程序 样品编辑与结果分析 实验结束后,进行样品编辑和数据分析
RT-qPCR原理的三个主要步骤: 1 反转录: 使用逆转录酶和特定引物将RNA样品反转录成cDNA。 该步骤将RNA模板转化为更稳定且可扩增的DNA形式。 反转录过程中使用特定引物。 2 PCR扩增: 使用特定引物对cDNA进行PCR扩增,这些引物环绕目标区域。 PCR是一个循环过程,呈指数级扩增DNA模板的数量。
(3)PCR 程序:42℃ 2min。 2.配制第一链 cDNA 合成反应液 (1)在 RNase-free 离心管中按照下表配制 20mμL 体系(以 Takara 试剂盒 Prime Script™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time),SYBR Green Ⅰ法为例)。 试剂 步骤 1 的反应液 Prime Script RT Enzyme Mix I RT Primer Mi ...
荧光定量RT-PCR步骤荧光定量real-time PCR反应步骤 一、RNA的抽提(捷瑞试剂盒GK3011) 准备: 1. 95%乙醇184ml+DEPC水至250ml(70%),擦拭台面(量筒、250ml瓶DEPC处理) 2.配置2ml氯仿/异戊醇(960ul﹕40ul)2管,20次 3.配置RPE Solution液,RPE/无水乙醇(180ul﹕720ul)10管,20次 4.恒温加热器调整到65℃ ...