探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。 三. RT-qPCR具体实验步骤 引物设计: 除了遵循一...
💻 上机操作:将配置好的反应液放入实时qPCR仪中,设置相应的温度循环和采集模式,进行扩增检测。real-time qPCR不需要常规PCR的三步法(变性、退火、延伸)。 由于产物长度短(80-150 bp),通常只需要变性和退火步骤。 使用SYBR Green等染料时,PCR后应加溶解程序以形成溶解曲线,判断特异性扩增。 📊 数据分析:通过扩...
【实验】酿酒酵母电击转化原理,操作方法,涂板,菌落PCR 37:35 【实验】丝状真菌的孢子悬液制备操作方法 24:53 【实验】丝状真菌的原生质体制备实验操作 45:40 【实验】PEG介导的丝状真菌的原生质体转化实验操作流程 40:20 【实验】液氮研磨菌丝的操作方法 06:05 【实验】丝状真菌基因组DNA的提取原理,操作...
PCR酶：可按需要选择普通的Taq酶、可扩增长片段的Taq酶或高保真酶。PCR体系：按所选的PCR酶说明书来配...
1. 打开Q2000B荧光定量PCR 仪,确认仪器设置正确。 2. 在全真彩触控屏上编辑 RT-QPCR 实验程序,包括预变性、扩增循环、延伸等步骤。 3. 配置 PCR 反应体系,加入 cDNA 产物、Master Mix、引物等。 4. 将反应体系分装至多孔板中,设置阴性对照、空白对照、标准品和未知样品等。
荧光定量RT-PCR步骤荧光定量real-time PCR反应步骤 一、RNA的抽提(捷瑞试剂盒GK3011) 准备: 1. 95%乙醇184ml+DEPC水至250ml(70%),擦拭台面(量筒、250ml瓶DEPC处理) 2.配置2ml氯仿/异戊醇(960ul﹕40ul)2管,20次 3.配置RPE Solution液,RPE/无水乙醇(180ul﹕720ul)10管,20次 4.恒温加热器调整到65℃ ...
实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR),是指在PCR反应体系中加入荧光标记物,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。一般用于mRNA转录水平的定量研究、不同样本或基因组中DNA拷贝数的测定、基因芯片结果验证、药效分析等。
实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 是一种用于实时扩增和检测特定 DNA 或 RNA 序列的分子生物学技术。该方法利用荧光染料或探针,当与扩增的 DNA 或 RNA 分子结合时会发出信号,从而可以对目标序列进行量化。RT-qPCR 通常用于基因表达分析、病毒载量定量和基因突变检测等应用。 RT-qPCR原理的三个主要步骤: 1 反转录: ...
3 实时荧光定量 PCR (qPCR)基本步骤：3.1 SYBR Green 3.2 TaqMans 探针 4 逆转录 PCR (RT-PCR)...