由于必需基因的功能必须性使其难以从基因组上被删除,而此前报道的方法存在效率低,非无痕敲除等缺点.基于此,该文建立了一种基于CRISPR/Cas9的基因组必需基因高效无痕敲除方法.以大肠杆菌metK基因(编码S-腺苷甲硫氨酸合酶)为例,首先将metK基因克隆至质粒pTarget-metK,并采用定点突变方式将metK基因进行同义突变移除对...